N-glikane-profilering is noodsaaklik vir die vervaardiging van biofarmaseutiese middels. Yaohai Bio-Pharma verskaf N-glikaan-profieldiens deur gebruik te maak van vloeistofchromatografie-massaspektrometrie (LC-MS) van vrygestelde en gemerkte glikane. Die algemene stappe vir die voorbereiding van N-glikanmonsters sluit vertering van die glikoproteïen (GP), de-glikosilering, suiwering, etikettering/derivatisering en vastefase-ekstraksie (SPE) in.
Ons was betrokke by die proteïenstrukturele karakterisering van verskeie groot molekules, insluitend rekombinante subeenheid-entstowwe, nanoliggame/VHHs/ enkeldomein-teenliggaampies (sdAbs), teenliggaamfragmente, hormone/peptiede, sitokiene, groeifaktore (GF), ensieme, kollagene, ens.
Regulerende vereistes vir N-Glycan-profilering
Volgens ICH Q6B-riglyn, "vir glikoproteïene word die koolhidraatinhoud (neutrale suikers, aminosuikers en siaalsure) bepaal. Daarbenewens word die struktuur van die koolhidraatkettings, die oligosakkariedpatroon (antennêre profiel) en die glikosileringsplek(ke) van die polipeptiedketting ontleed tot die mate moontlik.
Analitiese metode
| Analise |
Metodes |
| N-glikaan profilering |
Vloeistofchromatografie-massaspektrometrie (LC-MS) analise van vrygestelde en gemerkte glikane |
Prosedures
1. Ensiematiese glikaanvrystelling met Peptied N-Glycosidase F (PNGase F)
2. Derivatisering van vrygestelde glikane deur 2-aminobensamied (2-AB)
3. Suiwering van die geoesde N-glikane op 'n TSK Amide - 80 kolom indien groot hoeveelhede skoonmaakmiddels, nie-vlugtige soute of materiale met vrye aminogroepe teenwoordig is
4. Etikettering deur fluoresserende 2-aminobensamied (2-AB)
5. LC-MS analise van gemerkte N-glikane
6. Data-analise
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
GEEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
