Nyckelenzymer för lång-RNA-produktion
mRNA, som en typ av lång kodande RNA, fungerade säkert och effektivt i ett bredare spektrum av människor under COVID-19. Andra långkodande RNA, som självförstärkande RNA (saRNA) och cirkulärt mRNA (circRNA) visade också effektivitet i prekliniska och kliniska studier.
Storskalig produktion av långkodande RNA är beroende av in vitro-transkription (IVT) genom flera enzymatiska reaktioner. Stegen för RNA-produktion inkluderar mall-DNA-beredning, IVT-RNA-syntes, cirkulation, DNA-borttagning, RNA-modifiering (capping and tailing) och RNA-rening.
Det finns flera nyckelenzymer som används vid långkodande RNA-produktion (t.ex. mRNA, saRNA och circRNA), inklusive restriktionsendonukleaser, T7 RNA-polymeras (T7 RNAP), RNas-hämmare, oorganiskt pyrofosfatas, DNas I, vaccinia-capping-enzym och RNase R.
Behandla
|
Enzym
|
Funktion
|
Mall DNA-beredning
|
Restriktionsendonukleaser
|
Linjärisering av plasmid-DNA (pDNA) för att undvika att generera längre transkript.
|
IVT RNA-syntes
|
T7 RNA-polymeras (T7 RNAP)
|
Bind till T7-promotorn och generera specifikt RNA-transkript; Spela en nyckelroll under IVT-reaktion.
|
RNas-hämmare, rekombinant
|
Hämmar RNas-aktivitet under IVT-reaktion.
|
Pyrofosfatas, oorganiskt (iPPase)
|
Förhindra pyrofosfat under IVT-reaktion.
|
DNA-borttagning
|
DNas I
|
Ta bort DNA-mallen.
|
RNA modifiering
|
Vacciniatäckningsenzym
|
Lägg till Cap1-strukturer till 5′-ändarna av IVT-mRNA.
|
2'-XNUMX-metyltransferas
|
circRNA-anrikning
|
RNase R
|
Smält linjärt RNA och berika cirkulärt RNA.
|
Yaohai Bio-Pharma erbjuder en enda CDMO-lösning för enzymer