Cirkulär mRNA (circRNA) har används omfattande i studier av gener eller proteinfunktioner. Samtidigt är den populär inom utvecklingen av förebyggande och terapeutiska biologiska produkter, liknande mRNA.
Yaohai Bio-Pharma har etablerat en serie circRNA-syntestechniker för att erbjuda högkvalitativ RNA, såsom sekvensdesign och optimering, in vitro-transkription (IVT), cirkularisering/cykling, reningsprocesser och inkapsling i lipidnanopartiklar (LNP). Alla produkter släpps under strikta kvalitetskontrollstandarder (QC).
Jämfört med linjär mRNA är cirkulär RNA (circRNA) mer stabil i struktur och är en av de största aktuella fokusområdena inom forskning om nukleinsyrabaserade läkemedel. Den har ett brett tillämpningsområde inom olika fält, oavsett om det handlar om kodande circRNA eller icke-kodande circRNA, inklusive preventiva vaccin mot infektiösa sjukdomar, terapeutiska onkologivaccin, terapeutiska onkologiläkemedel, proteinknivsterapi, regenerativ medicin, cell- och generapi (CGT), molekylär spöngeffekt och RNA aptamer.
Process | Valfritt tjänstetillbud | Tjänstdetaljer | Leveranstid (Dag) |
design och optimering av circRNA-sekvenser | Design och optimering av kodningssekvenser | Optimering av CDS-kodon | 1 |
Design och optimering av icke-kodande sekvenser | Intron och exonsekvens, homolog arm och spacer design och optimering | 1-2 | |
Preparation av cirkulärt plasmid | Gensyntes | GeneSyntes (Tredjepart) | 7-10 |
Plasmidamplifiering | Plasmidamplifiering | 2 | |
Plasmidextraktion | |||
Linjär plasmidförberedelse | Plasmidlinjärisering och renad | Plasmidlinjärisering | 1 |
Linjärisering DNA renadning | |||
In vitro transkription och cyklisering | In vitro transkription och cyklisering | In vitro transkriptions- och cykliseringsreaktioner | 1-2 |
RNase R fordning | |||
Optimering - valfri | Reaktionsmängd, Tidsoptimering | 2-5 | |
circRNA-rengöring | Konventionell Reningsmetod | Lithiumkloridprecipitering | 1 |
Rening med magnetiska partiklar | 1 | ||
Höggradigt Rent circRNA Reningsmetod | Preparativ Högpresterande Vätskecromatografi (HPLC) | 1-2 | |
Bufferutbyte | Ultrafiltrering | 1 | |
circRNA lyofilisering | Provets Fyllning | Fyllning | 2-3 |
Lyofilisering | Förutfrysing | ||
Primärtdrucking (sublimation) | |||
Sekundärtdrucking (desorption) | |||
circRNA-LNP Inkapsling | LNP inkapsling | Material och vätskeförebehandling | 2 |
Mikrofluidisk enhetsblandning | |||
Bufferutbyte | Tangentiell flödesfiltrering | 1 | |
Steril | Filtrering | ||
Kvalitetskontroll av plasmid-DNA | Koncentration/härskap | Ultraviolett (UV) Spektrofotometri | 1-2 |
Plasmidkonformation | Agarosagel Elektrofores (AGE) | ||
Kapillärelektrofores (CE) - Valfritt | |||
Plasmididentifiering | Restriktionsenzymidentifiering/AGE | ||
Kvalitetskontroll av circRNA | Koncentration/härskap | Ultraviolett (UV) Spektrofotometri | - |
Renhet | Agarosgelelektrofores (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC - Valfritt | 1 | ||
Kvalitetskontroll av circRNA-LNP | Encapserings-effektivitet | RiboGreen-metoden | 1 |
Partikelform | Dynamisk ljusstödning (DLS) | 1 | |
Polydisperionsindex | Dynamisk ljusstödning (DLS) | 1 | |
Zetapotential | Dynamisk ljusstödning (DLS) | 1 | |
Cellbaserad effektivitetstestning | Celltransfektion | Cellplacering, celltransfektion | 4 |
Målproteinidentifiering | Fluorescensobservation, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Vi transfekterade cirkulärt RNA (circRNA) kodande för förstärkt grön fluorescerande protein (eGFP circRNA), mCherry circRNA och luciferase circRNA till 293T-cellerna och identifierade målproteinet genom fluorescens, lysens eller färgsignal, western blot (WB), enzyme-länkad immunosorbent assay (ELISA).
Cellbaserade effektivitetstester av circRNA-prover av Yaohai Bio-Pharma