Yaohai Bio-Pharma förbereder circRNA baserat på PIE-systemet (anpassning av exoner och introner), som förlitar sig på den självsplitsande funktionen hos typ I-introner för att uppnå RNA-cyklisering. PIE-strukturen är designad med hjälp av T4 td-genen eller fishy tRNA-prekursorgenen, och arrangemanget är som följer:
RNA-intronet och det stödjande exonfragmentet är uppdelade i två delar (5'-terminal och 3'-terminal), där den 5'-terminala sekvensen överförs till målsekvensens svans, den 3'-terminala sekvensen infogas i fronten av målsekvens, och målgensekvensen infogas i mitten.
Under katalys av GTP leder PIE-strukturen till cyklisering av andra sekvenser än introner. I kombination med en rimlig förbättringsstrategi för cykliseringshastighet, kan Yaohai Bio-Pharma uppnå cyklisering av sekvenser upp till 4 kb med en cykliseringshastighet på mer än 80 %.
Figur 1. In vitro-cirkulation av circRNA baserat på PIE-systemet
Tjänster detaljer
| Behandla |
Valfri tjänst |
Service detaljer |
Leveransperiod (arbetsdag) |
| circRNA-sekvensdesign och optimering |
Design och optimering av kodningssekvenser |
CDS-sekvensinriktning
CDS kodonoptimering
|
1 |
| Design och optimering av icke-kodande sekvenser |
Intron och exon sekvensdesign och optimering
Homolog armsekvensdesign och optimering
Spacer sekvens design och optimering
|
1-2 |
Gemensamma strategier för mRNA-sekvensdesign
| CircRNA-komponenter |
Biologiska funktioner |
Optimeringsstrategier |
| Tvåterminala intron- och exonsekvenser |
GTP-katalyserad intronsjälvsplitsning för cyklisering av sekvenser utanför intronen. |
Designad enligt T4 td-genen eller fiskolja tRNA-prekursorgenen. |
| Kodning |
IRES |
Intern ribosomigenkänningsplats som reglerar translationen av circRNA. |
Screening av IRES-sekvenser (intern ribosom entry site) från olika virala källor, t.ex. EMCV, CVB3-källor. |
| CDS |
Proteinkodande regioner, sekvenser som kodar för antigener, antikroppar eller andra funktionella proteiner. |
Kodonoptimering ökar översättningsnivån; vissa icke-optimala kodon kan spela en roll vid proteinveckning. |
| Icke-kodning |
Icke-kodande sekvenser |
Mål miRNA eller proteiner för att utöva gen- eller proteinreglering. |
Inriktning på specifika bindningsställen för miRNA eller proteiner kan upprepa sekvenserna för bindningsstället. |
Våra funktioner
- Optimerat PIE-cykliseringssystem Kombination med rimliga optimeringsstrategier för att uppnå en cykliseringshastighet på mer än 80 %;
- Banbrytande CDS-optimeringsteam Samarbete med professionellt AI-algoritmteam för att slutföra optimeringen av CDS-regionkodon;
- Mogen och perfekt process circRNA kan uppnås med hög cykliseringseffektivitet, hög stabilitet och hög translationseffektivitet.
Fallstudie
Yaohai Bio-Pharma lanserade kontrollprodukten förstärkt grönt fluorescerande protein (eGFP) circRNA, som är baserat på PIE-systemet för att uppnå cyklisering av RNA.
Med ett konventionellt transfektionsreagens transfekteras eGFP circRNA in i 293T-celler och eGFP (grön) fluorescerande signal kan detekteras efter 24 timmar, vilket kommer att förstärkas efter 48 timmar. Den fluorescerande signalen kan fortfarande detekteras på den 7:e dagen och den 14:e dagen efter transfektion.
In vitro expressionsvalidering av eGFP circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEJ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
