5'-ändtäckning är en väsentlig modifiering av mRNA. mRNA med cap-strukturer, särskilt Cap1-strukturer, underlättar att mRNA undviker medfödda immunsvar in vivo, vilket resulterar i effektiv proteintranslation.
Enzymatisk täckning (tvåstegsmetoden) är den konventionella metoden för mRNA-kapsling, liknande den i eukaryota organismer. Under verkan av en serie enzymer är 7-metylguanin (m7G) kopplat till 5'-änden av mRNA genom en 5'-5' trifosfatbindning och genomgår metyleringsmodifiering för att bilda cap-strukturen Cap 1 (m7GpppN).
Diagram över bildning av naturliga hattstrukturer
Det enzymatiska lockreaktionsflödet är som följer:
Linjäriserat plasmid-DNA används som mall för in vitro-transkription (IVT) i närvaro av T7-polymeras, och mRNA med en 5'-ändkapselstruktur bildas efter en enstegsrening med vaccinia-kapslingsenzymet och 2'-O -metyltransferas.
Tjänster detaljer
Valfri tjänst |
Service detaljer |
Leveransperiod (dag) |
mRNA enzymatisk täckning |
Enzymatisk täckningsreaktion |
1 |
Captering reaktion optimering - valfritt |
Reaktionskomponentdesign och optimering |
3 ~ 7 |
Våra funktioner
- Design och optimering av kapslingsreaktionskomponenten
Kapningsreaktionskomponenten är optimerad, och produktionen av mRNA-transkript ökar kraftigt.
- Verifiering av uttryck in vitro
Det täckta mRNA:t transfekteras in i 293T-celler och uttrycket av målproteinet kan detekteras.
- Stringent kontroll av RNase
Genom strikt kontroll av RNasesons experimentella miljö och förbrukningsvaror förhindras mRNA-nedbrytning effektivt.
Fallstudie
Yaohai Bio-Pharmas mRNA-plattform har byggt upp en perfekt övertäckningsreaktionsprocess.
För eGFP-mRNA, en mRNA-preprodukt framställd genom enzymatisk kapning, kan en eGFP-fluorescenssignal (grön fluorescens) på en hög nivå observeras efter transfektering av 293T-celler i 24 timmar, vilket detekteras av Western Blot (WB), vilket visar att målproteinförstärkt grönt fluorescerande protein (eGFP) kan uttryckas effektivt in vitro.
Expression av enzymatisk kapslad eGFP-mRNA i 293T-cell
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEJ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
