I beredningsprocessen av in vitro transkription (IVT) mRNA, krävs linjäriserat plasmid DNA som transkriptionsmall för IVT med hjälp av T7 RNA polymeras. Plasmid-DNA av hög kvalitet är avgörande för transkription in vitro.
Baserat på tjänsteplattformen för mogna plasmidberedningar kan Yaohai Bio-Pharma erbjuda en linjäriserad plasmid-DNA-beredningstjänst av hög renhet och hög standard för att uppnå effektiv IVT-transkription.
Behandla | Valfri tjänst | Service detaljer | Leveransperiod (arbetsdag) |
Cirkulär plasmidberedning | Gensyntes | Gensyntes (tredje part) | 7-10 |
Plasmidförstärkning | Plasmidförstärkning | 2 | |
Plasmidextraktion | |||
Linjäriserad plasmidberedning | Plasmidlinjärisering och rening | Plasmidlinjärisering | 1 |
Linjärisering DNA-rening | |||
Plasmid DNA kvalitetskontroll | Koncentration renhet | Ultraviolett (UV) spektrofotometri | 1-2 |
Plasmidkonformation | Agarosgelelektrofores (AGE) | ||
Kapillärelektrofores (CE)-valfritt | |||
Plasmididentifiering | Restriktionsenzymidentifiering/ AGE |
Flexibelt urval av linjäriseringsmetoder
Optimering av DNA-extraktion och reningsmetoder för att uppnå höga återvinningsgrader.
Stringenta processkontrollstandarder, med en superhelical konformationshastighet av plasmidprover för forskning på över 80 %.
Hög standard och högeffektiv plasmidberedning och kvalitetskontrolltjänster för att möta experimentella behov.
Om man tar Yaohai Bio-Pharma-katalogen mRNA_luciferas-produkt som ett exempel, har transkriptionsmallplasmidprovet (forskningskvalitet) ett superhelixförhållande på mer än 90 %, ett linjäriseringsförhållande nära 100 % och ett efterföljande transkriptionsförhållande upp till 1:200 ( linjäriserad plasmid DNA:mRNA).
Det mRNA_luciferas som erhålls genom framställning av en linjäriserad plasmid som en mall transfekteras in i 293T-celler, och enzym-substratreaktionsaktiviteten utvärderas 24 timmar efter transfektion.
En uppenbar stark luciferasaktivitetssignal kan detekteras, dvs. luciferasproteinet uttrycks effektivt, vilket tyder på att renheten hos transkriptionsmallen helt kan tillfredsställa kravet på högkvalitativt mRNA-beredning.
Supercoiled Plasmid Ratio Assay
Validering av luciferas-mRNA-uttryck in vitro