Anpassad saRNA-syntes
Självförstärkande mRNA (saRNA), även känd som replikon-RNA, kodar för in vitro-transkription (IVT) mRNA-sekvenser och virala replikasgener härledda från alfavirus eller flavivirus. Virala replikasgener tillåter självförstärkning av mRNA, vilket resulterar i ökat proteinuttryck och en minsta nödvändig dos av RNA i jämförelse med icke-amplifierande mRNA. En annan aspekt är att saRNA är en relativt stor molekyl (mer än 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma har etablerat en uppsättning mRNA-syntesteknologier för att tillhandahålla icke-förstärkande mRNA och självförstärkande mRNA (1000 nt~14000 nt), såsom sekvensdesign och optimering, IVT, rening, lyofilisering och lipidnanopartikel (LNP) inkapsling . Alla produkter släpps under stränga kvalitetskontrollstandarder.
Fig. 1 Strukturella egenskaper hos IVT-mRNA: Konventionellt, cirkulärt och självförstärkande mRNA.
Sekvensegenskaper hos självförstärkande mRNA
Det självförstärkande RNA:t omfattar fyra icke-strukturella proteiner (betecknade som nsP1, nsP2, nsP3 och nsP4), som härrör från alfavirus, venezuelanskt hästencefalitvirus (VEEV). Bland dessa uppvisar nsP1 dubbla enzymatiska aktiviteter, nämligen GTase och N7MTase, medan nsP2 har RTPase-aktivitet, avgörande för att täcka IVT-mRNA för att generera Cap 0-struktur. Dessutom fungerar nsP2 som ett proteas och helikas, vilket underlättar den komplicerade bearbetningen av hela nsP-komplexet. Den exakta funktionen av nsP3 förblir svårfångad, men den engagerar sig i interaktioner med olika värdcellsproteiner, och bidrar därigenom till att dämpningen av det antivirala svaret som uppstår av värden.
En alfavirus subgenomisk promotor (SGP) region är belägen före genen av intresse (GOI). SGP-elementet underlättar initieringen av GOI-transkription genom att förbigå läsningen av sekvensen som kodar för virala nsP-proteiner.
Fig.2 Syntes och cellanalyser av eGFP saRNA från Yaohai Bio-Pharma RNASci Platform.
Anpassade lösningar av saRNA
Syntesprotokollet för saRNA liknar mRNA: Anpassad mRNA-syntes
- Sekvensdesign
- Beredning av plasmidmall
- in vitro transkription (IVT)
- mRNA-enzymatisk täckning
- mRNA Co-transcription Capping
- mRNA-rening
- mRNA-lyofilisering
- LNP-inkapsling
- Analys och testning
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEJ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
