CircRNA-beredning kräver linjärt RNA som prekursormaterial (RNA-prekursor) för cyklisering, där RNA-prekursorn vanligtvis framställs med hjälp av linjäriserat plasmid-DNA som transkriptionsmall och transkriberas in vitro med hjälp av T7 RNA-polymeras.
Högkvalitativt plasmid-DNA är väsentligt för in vitro-transkription (IVT). Baserat på tjänsteplattformen för mogna plasmidberedningar kan Yaohai Bio-Pharma tillhandahålla en hög renhet och standard lineariserad plasmid DNA (pDNA) förberedelsetjänst för att säkerställa integriteten hos IVT-produkter.
Behandla | Valfri tjänst | Service detaljer | Leveransperiod (arbetsdag) |
Cirkulär plasmidberedning | Gensyntes | Gensyntes (tredje part) | 7-10 |
Plasmidförstärkning | Plasmidförstärkning | 2 | |
Plasmidextraktion | |||
Linjäriserad plasmidberedning | Plasmidlinjärisering och rening | Plasmidlinjärisering | 1 |
Linjärisering DNA-rening | |||
Plasmid DNA kvalitetskontroll | Koncentration renhet | Ultraviolett (UV) spektrofotometri | 1-2 |
Plasmidkonformation | Agarosgelelektrofores (AGE) | ||
Kapillärelektrofores (CE)-valfritt | |||
Plasmididentifiering | Restriktionsenzymidentifiering/ AGE |
Flexibelt urval av linjäriseringsmetoder
Optimering av DNA-extraktion och reningsmetoder för att uppnå höga återvinningsgrader.
Stringenta processkontrollstandarder, med en superhelical konformationshastighet av plasmidprover för forskning på över 80 %.
Hög standard och högeffektiv plasmidberedning och kvalitetskontrolltjänster för att möta experimentella behov.
Om man tar Yaohai Bio-Pharmas produkt mCherry circRNA som ett exempel, är det supercoilade förhållandet av transkriptionsmallplasmidprover (forskningskvalitet) mer än 70 %, med en linjäriseringshastighet på nära 100 %.
mCherry circRNA framställs med linjäriserad plasmid som mall och transfekteras in i 293T-celler. Hög nivå av fluorescensuttryck (röd fluorescens) detekteras efter 24 timmars transfektion, vilket kommer att förstärkas efter 48 timmar, och kan fortfarande detekteras på den 7:e dagen och den 14:e dagen efter transfektion.
mCherry-protein uttrycks stabilt och effektivt, och transkriptionsmallrenheten kan uppfylla kravet på circRNA-läkemedelsprodukt (DP) med hög kvalitet.
In vitro expressionsvalidering av mCherry circRNA