CircRNA-förberedelse kräver linjär RNA som föregångarmaterial (RNA-föregångare) för cikliseringsprocessen, där RNA-föregångaren vanligtvis förbereds med hjälp av linjär plasmid-DNA som transkriptionsmall och transkriberas in vitro med hjälp av T7 RNA-polymeras.
Högkvalitativ plasmid-DNA är avgörande för in vitro-transkription (IVT). På grundval av ett etablerat plattformstjänstsystem för plasmidförberedelse kan Yaohai Bio-Pharma erbjuda en tjänst för högrehetlig och standardlinjär plasmid-DNA (pDNA)-föreberedelse för att säkerställa integriteten hos IVT-produkterna.
Process | Valfritt tjänstetillbud | Tjänstdetaljer | Leveranstid (arbetsdag) |
Preparation av cirkulärt plasmid | Gensyntes | GeneSyntes (Tredjepart) | 7-10 |
Plasmidamplifiering | Plasmidamplifiering | 2 | |
Plasmidextraktion | |||
Linjär plasmidförberedelse | Plasmidlinjärisering och renad | Plasmidlinjärisering | 1 |
Linjärisering DNA renadning | |||
Kvalitetskontroll av plasmid-DNA | Koncentration renaad | Ultraviolett (UV) Spektrofotometri | 1-2 |
Plasmidkonformation | Agarosagel Elektrofores (AGE) | ||
Kapillärelektrofores (CE) - Valfritt | |||
Plasmididentifiering | Restriktions enzymidentifiering/AGE |
Flexibel val av lineariseringsmetoder
Optimering av DNA-extraherings- och reningsmetoder för att uppnå höga återvinningskvoter.
Strikt processkontrollstandard, med en superhelisk konformationsfrekvens på plasmidprov för forskning på över 80%.
Hög standard och effektiv plasmidtillberedning och kvalitetskontrolltjänster för att uppfylla experimentella behov.
Med Yaohai Bio-Pharmas produkt mCherry circRNA som exempel, är superkoldelen av transkriptionsplasmidssamplarna (forskningsekvalitet) mer än 70%, med en linjäriseringsgrad nära 100%.
mCherry circRNA förbereds med linjäriserat plasmid som mall och transfekteras till 293T-cellerna. Ett högt uttryck av fluorescens (röd fluorescens) upptäcks efter 24 timmars transfektion, vilket förstärks efter 48 timmar och kan fortfarande upptäckas på sjunde och fjortonde dagen efter transfektionen.
mCherry-proteinet uttrycks stabilt och effektivt, och renheten av transkriptionsmallen kan uppfylla kraven på circRNA-läkemedelsprodukt (DP) av hög kvalitet.
In vitro validering av mCherry circRNA-uttryck