Betydelsen av utvecklingen av övreströmsprocess
Övreströmsprocessen (USP), även känd som fermenteringsprocess, är en av de inledande faserna av övreströmsbiobearbetning. Den mikrobiella fermenteringsprocessen är avgörande för högdens cellkultur och uttryck av främmande gener, vilket påverkar direkt产量 och kostnad av biologiska produkter.
I de tidiga stadierna av utvecklingen av biologiska produkter (preklinisk eller fas 1/2) fokuserar man på att utveckla skalbara djurfria processer med mellanligga utslag och uppfylla alla produktkvalitetsstandarder.
När vi befinner oss i de senare stadierna (fas 3 eller kommersiell), kommer vi att fokusera på avkastning, robusthet, skalbarhet och reproducerbarhet, med syfte att skapa en kostnadseffektiv process. De aktiviteter som behandlar dessa frågor är processkaraktärisering och processvalideringsstudier. Under tiden tillämpas vanligtvis verktyg som kvalitet genom design (QbD) och experimentdesign (DoE).
Nyckelord: processutveckling, optimering och validering, färdesprocess, mikrobiell celldatafärde, bakteriefärde, jostfärde, högdensitetsfärde, konstruerad stamfärde
Tillämpning: Biomedicinsk industri, humant medicin, djurmedicin, vaccin, rekombinant större molekylbiologiska produkter, rekombinant biologiska produkter, biologisk reagens
USP-lösningar från Yaohai Bio-Pharma
Tack vare mer än 10 års erfarenhet av mikrobiell färdesprocess har Yaohai Bio-Pharma expertis för att hjälpa till med att lösa färdesprocessutmaningar. Vi kan snabbt etablera strategier för högdensitetsfärde för Escherichia coli (E. coli) periplasmisk sekretion, intracellulär löslig eller inklusionskroppsyte och jordbävers extracellulär eller intracellulär expression.
Våra tillgängliga allmänna färderingsutvecklings tjänster omfattar:
- Färderingsprocessdesign utförd i liten skala på 7L i fed-batch-läge
- Trebatchprocessvalidering i 7L-färderare
- En mellanskalig processuppskalning till 30L/70L
Vi kan flexibelt genomföra optimering av flera parametrar för att uppnå den önskade utbytet eller proportionen, med hjälp av One-Time-A-Factor (OTAF) eller Design-of-experiments (DoE).
Några viktiga färderingsparametrar listas nedan:
Fjärilshaltiga färderingsmedelssammansättningar
Antibiotikafritt eller ej, Inokulumvolym
Växttemperatur, pH, Nivå av upplöst syre (DO)
Födningssätt (t.ex., fed-batch)
Koncentration av inducerare (t.ex., IPTG, metanol), Induceringspunkt (cellvåtvikt/OD600),
Inducerstemperatur, Indiceratid
osv.
Tjänstdetaljer
| Tjänster |
Processflöde |
| Odling i skakflaska (500 mL) |
Tillagning av djurfri medium → Odling av mikrobergsseed → Odling i shaker → Induktion → Skörde |
| Odling i fermenter (7 L) |
Tillagning av djurfri medium → Odling av mikrobergsseed → Högdensitetscelldermering i 7L-bioreaktor → Induktion → Skörde |
| Kvalitetskontroll av proteiner/peptider |
Förbehandling Intracellulär löslig expression: Mikroberzellhavst och omförsel → Ultralydskrushing → Cellerbargsborttagning → Råextrakt Inklusionskroppsexpression: Mikroberzellhavst och omförsel → Ultralydskrushing → inkusionskroppspreparation → Råextrakt Extracellulär löslig expression: Kultursupernatansamling → Koncentration och buffertutbyte → Råextrakt Kvalitetsanalys Råextrakt som prov → Målproteinanalys med SDS PAGE eller Western blotting (WB) |
| Kvalitetskontroll av plasmider |
Förbehandling och kvalitetsanalys Plasmidextraktion → DNA-analys med agarosgelelektrofores |
Fallstudie
Vi har fått i uppdrag av vår kund att öka utbytet av målpolypeptidhormonet från 8 g/L till 10 g/L.
Med utgångspunkt i Full Factorial Design och Response Surface Design i DoE-verktygen, kunde vi snabbt identifiera och optimera de nyckelparametrar för färderingen. Under den optimerade högcellstäthetsfärderingsprocessen ökade uttrycksnivån till 10 g/L.
Vår erfarenhet
- Vi har arbetat med olika typer av mikrober, t.ex., E.coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; Pichia pastoris (P. pastoris) SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink strain1/2/3/4; Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) och Hansenula polymorpha (H. polymorpha) .
- Vi har erfarenhet av E. coli periplasmisk sekretion, löslig och inklusionskroppsuttryckning, samt jäst intracellulär eller extracellulär uttryckning. Inkluionskroppsyielden når upp till 10 g/L, medan lösligt proteinyield ligger mellan 0,5 och 15 g/L.
- Vi har varit inblandade i utvecklingen och tillverkningen av olika stora molekyler, inklusive rekombinanta subenhetervacciner, virusliknande partiklar (VLP), hormoner (insulin, GLP-1, växtfrämmande hormon), cytokiner (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), växthusfaktorer (EGF, FGF, NGF), nanokroppar/enskifteantikroppar (sdAbs), enzym, etc.
- Utrustning
7L*16 Fermenteringssystem
Cedex Bio Analyzer, Bioprocess analyzer
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
