Deamidering av glutamin- och asparaginsidokedjor är en vanlig modifiering när det gäller inverkan på egenskaperna hos proteinbioläkemedel. Deamidering kan ske i glutaminrester, men vanligtvis i mycket lägre hastighet. Deamideringshastigheterna påverkas av temperatur, pH, lokal proteinstruktur och flankerande aminoacylrester.
Yaohai BioPharma erbjuder testtjänst för aminosyradeamidering, som gör att du kan detektera aminosyradeamidering med vätskekromatografi-masspektrometri (LC-MS).
Vi har varit involverade i proteinstrukturkarakterisering av olika stora molekyler, inklusive rekombinanta subenhetsvacciner, nanokroppar/VHHs/enkeldomänantikroppar (sdAbs), antikroppsfragment, hormoner/peptider, cytokiner, tillväxtfaktorer (CF), enzymer, kollagener, etc.
Regulatoriska krav för aminosyradeamidering
Enligt ICH Q6B-riktlinjerna kan deamiderade former detekteras och karakteriseras med kromatografiska, elektroforetiska och/eller andra relevanta analysmetoder.
Analytiska metoder
| Analys |
Metoder |
| Deamidering |
Vätskekromatografi-masspektrometri (LC-MS) |
Förfaranden
t.ex. asparaginsyradeamidering
1. Enzymatisk nedbrytning
2. LC-MS under High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) tillstånd
3. Dataanalys
Asparagindeamidering sker via en succinimidintermediär (Suc), som är känslig för racemisering och hydrolys, vilket ger fyra Asp-isomerer, inklusive L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp och D-IsoAsp.
I teorin kan Gln-deamidering generera fyra motsvarande Glu-isomerer genom en process som liknar Asn-deamidering.
Den högupplösande masspektrometrin identifierar lätt 1-Da-masskillnaden mellan Asn/Gln-innehållande peptider och deras motsvarande deamiderade motsvarigheter Asp/Glu.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEJ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
