Vätskekromatografi-masspektrometri (LC-MS) baserad peptidkartläggningsdata kommer att tillhandahålla en stor mängd information om den primära och högre ordningens struktur av nativa och rekombinanta proteiner, inklusive aminosyrasekvenstäckning, posttranslationella modifieringar (PTM, t.ex. glykosylering) oxidation, deamidering), disulfidbindningar, etc.
Yaohai Bio-Pharma erbjuder peptidkartläggningsanalystjänster för ditt målprotein av LC-MS, för att påskynda din forskning om proteinstruktur.
Vi har varit involverade i proteinstrukturkarakteriseringen av olika stora molekyler, inklusive rekombinanta subenhetsvacciner, nanokroppar/VHHs/enkeldomänantikroppar (sdAbs), antikroppsfragment, hormoner/peptider, cytokiner, tillväxtfaktorer (GF), enzymer, kollagener, etc.
Regulatoriska krav för peptidkartläggning
ICHQ6B-riktlinjen rekommenderar: "Selektiv fragmentering av produkten till diskreta peptider utförs med användning av lämpliga enzymer eller kemikalier och de resulterande peptidfragmenten analyseras med HPLC eller annan lämplig analytisk procedur. Peptidfragment bör identifieras så långt det är möjligt med hjälp av tekniker som aminosyrasammansättningsanalys, N-terminal sekvensering eller masspektrometri (MS). Peptidkartläggning av den aktiva substansen eller läkemedelsprodukten (DP) med en lämpligt validerad metod är en metod som ofta används för att bekräfta den önskade produktstrukturen för batchfrisättning."
Analytiska metoder
| Analys |
Metoder |
| Peptidkartläggning |
Proteasdigestion och vätskekromatografi-masspektrometri (LC-MS) |
Analytiskt förfarande
1. Reduktion och alkylering
Syftet är att reducera disulfidbryggor och blockera den genererade fria tiolen. Minskning av disulfidbryggor hjälper till att öppna proteinstrukturen vilket gör den proteolytiska nedbrytningen mer effektiv. Detta steg kommer också att bryta bryggorna mellan kedjorna i fallet med flerkedjiga proteiner som har disulfidbryggor som länkar samman kedjorna (t.ex. monoklonala antikroppar, mAbs).
2. Digestion av proteinet med hjälp av enzymer
Syftet är att bryta ner proteinet till peptider. Vi valde enzymerna baserat på proteinets teoretiska sekvens och kunskapen om teoretisk nedbrytning av proteinet av enzymer. Genom att välja enzymer på detta sätt bör det resultera i den bästa peptidkartläggningsanalysen.
3. Analys av de smälta peptiderna Använder on-line omvänd fas-högpresterande vätskekromatografi med ultraviolett (UV) och elektrospray-masspektrometrisk detektion (LC/ES-MS).
Peptidseparation baserad på polaritet med LC (omvänd fas-LC)
När peptiden eluerar från LC-kolonnen kommer masspektrometern att generera massinformation tillsammans med fragmentjoninformation, vilket gör att vi kan bestämma sekvensinformationen. Vi använder sekvensinformationen för att bekräfta peptididentitet och tillhandahålla primär information.
Vi kan också generera fragmenteringsinformationen från peptiderna när de kommer in i masspektrometerkällan från LC-kolonnen. Beroende på studiens krav är detta antingen selektiv LC-MS/MS eller icke-selektiv, vilket kan betraktas som en form av tandem-MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEJ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
