Data från peptidkartläggning baserad på vätskechromatografi-masspektrometri (LC-MS) kommer att ge en stor mängd information om den primära och högre ordningen av strukturen hos nativa och rekombinanta proteiner, inklusive dekryptering av aminosyrföljd, post-translationala modifieringar (PTM, t.ex. glykosylation, oxidation, deamidation), disulfidbindningar, etc.
Yaohai Bio-Pharma erbjuder analys tjänster för peptidkartläggning av ditt målprotein med LC-MS, för att föra fram din forskning om proteinstruktur.
Vi har varit inblandade i Proteinstrukturell karaktärisering av olika stora molekyler, inklusive Recombinant Subunit Vaccines, Nanokroppar/VHHs/En-domänantikroppar (sdAbs), Antikroppsfragment, Hormoner/Peptider, Cytokiner, Växtfaktorer (GF), Enzymer, Kollagener mm.
Reglerkrav för Peptidekartläggning
ICHQ6B-riktlinjen rekommenderar: ”Urvalsmässig fragmentering av produkten i diskreta peptider utförs med lämpliga enzym eller kemikalier och de resulterande peptidfragmenten analyseras med HPLC eller andra lämpliga analytiska procedurer. Peptidfragment ska identifieras så långt som möjligt med tekniker som analys av aminosyrförekomst, N-terminalsekvensering eller masspektrometri (MS). Peptikkartläggning av det aktiva ämnet eller läkemedelsprodukten (DP) med en tillräckligt validerad metod är en metod som ofta används för att bekräfta den önskade produktstrukturen vid batchsläpp.”
Analytiska Metoder
| Analys |
Metoder |
| Peptidkartläggning |
Proteasfragmentering och Vätskechromatografi-Masspektrometri (LC-MS) |
Analytisk Procedure
1. Reduktion och Alkylering
Syftet är att minska disulfidbroar och blockera de genererade fria thiolen. Minimering av disulfidbroar hjälper till att öppna proteinkonstruktionen, vilket gör proteolytisk spaltning mer effektiv. Denna steg kommer också att bryta broarna mellan kedjorna i fallet med flerkedjeproteiner som har disulfidbroar som länkar kedjorna (t.ex. monoklonala antikroppar, mAbs).
2. Spaltning av proteinet med enzym
Syftet är att bryta ner proteinet till peptider. Vi väljer enzym baserat på det teoretiska sekvensavlägget av proteinet och kunskapen om den teoretiska spaltningen av proteinet av enzym. Att välja enzym på detta sätt bör resultera i den bästa peptidkartanalysen.
3. Analys av de spaltningsprodukterna Med hjälp av On-line Reverse Phase-Högpresterande Vätskechromatografi med Ultraviolet (UV) och Elektrospray-Masspektrometrisk Detektering (LC/ES-MS).
Peptidskiljning baserad på polaritet med LC (reverse phase-LC)
När peptidet eluerar från LC-kolumnen kommer masspektrometern att generera massainformation tillsammans med informationsfragmentioner, vilket låter oss bestämma sekvensinformation. Vi använder sekvensinformationen för att bekräfta peptidets identitet och ge primär information.
Vi kan också generera fragmentationsinformationen från peptiderna när de går in i masspektrometerkällan från LC-kolumnen. Beroende på studiens krav är detta antingen selektiv LC-MS/MS eller icke-selektiv, vilket kan betraktas som en form av tandem MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
