N-glykosyleringsplatsupptagande är en fysiologisk egenskap hos glykoproteiner och producerar främst N-glykaner. Yaohai Bio-Pharmas tjänst för analys av N-glykosyleringsplatsupptagande utförs genom förtäring, frigörande, berikning och analys med hjälp av Vätskechromatografi-Elektrospray-Ionisationsmasspektrometri-Masspektrometri (LC-ESI-MS/MS).
Vi har varit inblandade i Proteinstrukturell karaktärisering av olika stora molekyler, inklusive Recombinant Subunit Vaccines, Nanokroppar/VHHs/En-domänantikroppar (sdAbs), Antikroppsfragment, Hormoner/Peptider, Cytokiner, Växtfaktorer (GF), Enzymer, Kollagener mm.
Reglerkrav för N-glykosyleringsplatsupptagande
Enligt ICH Q6B-riktlinjen, ”för glykoproteiner bestäms kolhydrathalten (neutrala socker, aminosocker och sialinsyror). Dessutom analyseras strukturen av kolhydratkedjorna, oligosackaridmönstret (antennprofilen) och glykyleringssiterna på polypeptidkedjan i så stor utsträckning som möjligt.”
Analytisk metod
| Analys |
Metoder |
| Besättning av N-glykosyleringssida |
LC-MS efter deglykosylase och proteasförsättning |
Procedurer
1. Proteinförsättning av protein för att generera små peptidfragment.
2. Frigörande av N-glykaner med endoglykosidas H eller PNGase F. Endoglykosidas H klyver bindningen mellan de två GlcNAc-residynerna i kärnan av N-länkade glykaner, medan PNGase F är en glykoamidas som klyver bindningen mellan GlcNAc och Asn, vilket frigör hela sockerkedjan och omvandlar Asn till Asp med en massökning på 1-Da.
3. Enrichment av N-glycopeptider via HILIC (Hydrofil Interaktion Vätskechromatografi)
4. Analyse av N-länkad glykyleringssitsuppfyllning med LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
