Jämfört med den tvåstegs enzymatiska kapningsmetoden kan den enastegs samtidiga transkriptionskapningsmetoden minska processflödet på ett betydande sätt. Metoden är resultatorienterad och innebär tillägg av kapanaloger till den in vitro transkriptionen (IVT). Kapanaloger kan introduceras vid transkriptionens början, och mRNA med kapstruktur kan erhållas när transkriptionen är klar. De aktuella tredjegenerationskapanalogerna kan undvika omvänt kapning och lägga till Cap 1-struktur direkt på transkriptionsprodukten.
Vid överväganden av mRNA:s in vivo immunogenitet och översättningseffektivitet används ofta vissa typer av modifierade NTP:er i IVT-processen, och vanliga modifierade nukleotider är pseudouridin (Ψ), N1-metyl-pseudouridin (N1Ψ) och 5-metylcytosin (5mC).
Figur: Diagram över mRNA ko-transkriptionell och kapningsreaktion
Tjänstdetaljer
Tjänst |
Tjänstdetaljer |
Leveranstid (arbetsdag) |
Ko-transkriptionell kapning |
In vitro transkriptionsrespons (Clean Cap analog) |
1-2 |
| Nukleotidmodifieringar (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Borttagning av DNA-mall (DNase I) |
Optimering av IVT-villkor - valfritt |
Design och optimering av reaktionskomponenter |
3-7 |
Våra egenskaper
- Diversifierade Nukleotidmodifieringsstrategier
Flera valbara nukleotidmodifieringsstrategier kan förbättra proteinetablering.
- Optimerat Reaktionssystem
Uppnå en hög transkriptionsgrad och hög kapningseffektivitet.
Uppnå en kapningsfrekvens på mer än 95%.
Förhindra effektivt degradering av mRNA genom strikt kontroll av RNas i det experimentella miljön och konsumtionerna.
Fallstudie
Yaohai Bio-Pharma har skapat en modulen kapningsprocessplattform, där rena kapanaloger används för att direkt lägga till Cap1-struktur samtidigt som omvänd kapning undviks. Efter standardiserad provförening och kapillärelektrofores (CE)-detektering kan kapningsfrekvensen för mRNA med förstärkt grön fluorescentsprotein (eGFP) uppnå mer än 95%.
kapningseffektivitet för eGFP mRNA på mer än 95%
EGFP-mRNA och mCherry-mRNA, som har förberetts genom koprocessionell kapning, transfekteras respektive i 293T-celler, och en stark fluorescerande signal observeras efter 48 timmar, vilket indikerar att mRNA effektivt uttrycks i 293T-celler.
Uttryck av eGFP-mRNA och mCherry-mRNA i 293T-cell
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
