Nedströms processutveckling

Mikrobiell CDMO

Betydelsen av utveckling av nedströmsprocesser (DSP).

Hela fermenteringsbuljongen innehåller målprotein eller plasmid, såväl som produkt- och processrelaterade föroreningar, t.ex. aggregat, mikrobiella cellsubstrat, värdcellsproteiner (HCP), värdcells-DNA (HCD), endotoxin och antibiotika.

Därför är det avgörande att utforma en effektiv DSP, reningsprocess, för att ta bort vissa föroreningar och producera högrenade och högkvalitativa läkemedelssubstanser. Dessutom kan optimeringen av reningsprocessen hjälpa till att öka produktåtervinningen, minska kostnaderna och förbättra processens skalbarhet och reproducerbarhet.

Nyckelord: processutveckling, optimering och validering, reningsprocess, kromatografi, föroreningseliminering, HCP-borttagning, HCD-eliminering, endotoxin-borttagning, proteindenaturering och återveckning, VLP-sammansättning, konjugering

Användning: Biofarmaceutisk industri, humanmedicin, djurmedicin, vaccin, rekombinanta biologiska medel med stor molekyl, rekombinanta biologiska läkemedel, biologiska reagens

DSP Solutions of Yaohai Bio-Pharma

Vi har lång erfarenhet av att isolera målproteiner eller plasmider från komplexa matriser genom att utveckla och optimera nedströms reningsprocess. Det finns olika typer av enhetsoperationer som är lämpliga för rening av biologiska läkemedel, inklusive centrifugering, filtrering, homogenisering, alkalisk lysering, ultrafiltrering, utfällning, proteindenaturering och återveckning, kromatografi, etc.

Våra tillgängliga reningsutvecklingstjänster inkluderar:

Utveckling av hela reningsprocessen från cell- eller supernatantuppsamling till den slutliga aktiva ingrediensen.
Optimering av reningsprocessen baserat på produkt- och processrelaterade föroreningar för att öka produktkvalitet och säkerhet, t.ex. HCP, HCD, endotoxin.
Definition och optimering av nyckelparametrar i en eller flera enhetsoperationer, inklusive cellys, tangentiell flödesfiltrering, hartsscreening, kromatografi, proteindenaturering och återveckning, etc.
Optimering av process vad gäller kvalitet, avkastning, återvinning, kostnad och skalbarhet.
Validering av nedströms reningsprocessen.
Riskbaserad parameterintervallsbedömning och Design of Experiments (DoE) i processmodellering.

Service detaljer

Standardiserade protein- eller plasmidreningsplattformar är baserade på flera råa reningssteg och mindre än 4 kromatografisteg, inklusive infångning, mellanliggande rening och polering.

Service detaljer	Enhetsverksamhet	parametrar
Rå rening	centrifugering	Rotationshastighet, tid
	Högtryckshomogenisering	Totalt fast innehåll, tryck, cykler
	Kontinuerlig alkalisk lysering	Förhållandet mellan återsuspenderade celler och lyseringslösning, lyseringstid
	Tangentiell flödesfiltrering	Membranmaterial och porstorlek, matningsflödeshastighet transmembrantryck (TMP), förhållande mellan filtratvolym och membranarea
	utfällning	Typ av utfällning och koncentration, tillsats, pH, temperatur, tid
Denaturering och återveckning	Inklusionskroppsproteinsolubilisering	Koncentration av denatureringsmedel (t.ex. urea, guanidin-HCl, starkt joniskt tvättmedel), rengöringsmedel (t.ex. natriumdodecylsulfat, SDS), reduktionsmedel (t.ex. ditiotreitol, DTT), kelatbildande medel (etylendiamintetraättiksyra, EDTA), temperatur, tid
Denaturering och återveckning	Proteinåterveckning	Återveckningsmetoder (spädning, dialys eller SEC-återveckning), proteinkoncentrationer, buffertar, pH, temperatur, tid, oxiderande och reducerande medel (t.ex. glutation, GSH/oxiderat glutation, GSSH, DTT/GSSH, cystein/cystin), småmolekylära tillsatser (L-arginin, urea, guanidin/HCl och tvättmedel)
Infångning, mellanrening och polering	AC (affinitetskromatografi)	Flera typer av kromatografiharts/kolonn (t.ex. AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), kolumnlängd och diameter, buffertsammansättning, injektionsvolym, mobilfassammansättning (adsorption och desorption), pH, flödeshastighet, bindning, Tvätt- och elueringsförhållanden.
	IEX (anjon- eller katjonbyteskromatografi)
	HIC (hydrofobisk interaktionskromatografi)
	Avsaltnings- och/eller storleksuteslutningskromatografi (SEC)
	RPC (Reversed Phase Chromatography)
	MMC, blandad kromatografi

Fallstudie

fallet 1

Vi får i uppdrag att utveckla och optimera nedströmsreningsprocessen för att öka proteinrenheten från 85 % till 90 % samtidigt som kromatografistegen reduceras.

Yaohai levererade en robust och skalbar reningsprocess med 3 steg av kromatografi för målproteinet, en bakteriell allergi. Och den slutliga renheten nådde 95%.

fallet 2

Yaohai utsågs av vår kund för att optimera endotoxinavlägsnandeprocessen för vaccinet med virusliknande partiklar (VLP).

Vårt team utförde optimering av kromatografiparametrar och beredde en läkemedelssubstans med en renhet på 98 % och en endotoxinrester på 12.8 EU/mg.

Våra erfarenheter

Vi har varit involverade i utveckling och tillverkning av olika stora molekyler, inklusive rekombinanta subenhetsvacciner, VLP, hormoner (insulin, GLP-1, tillväxthormon), cytokiner (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21 ), tillväxtfaktorer (EGF, FGF, NGF), nanokroppar/endomänantikroppar (sdAbs), enzymer, etc.

Equipment

Vi använder branschledande AKTA Pure, AKTA Avant och Preparative HPLC-system för att utföra olika kromatografimetoder inklusive affinitet, jonbyte, hydrofob interaktion, omvänd fas och storleksuteslutningskromatografi.

alla kategorier

Nedströms processutveckling

Mikrobiell CDMO