Данные картирования пептидов на основе жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС) предоставят большое количество информации о первичной структуре и структуре более высокого порядка нативных и рекомбинантных белков, включая покрытие аминокислотных последовательностей, посттрансляционные модификации (PTM, например, гликозилирование). , окисление, дезамидирование), дисульфидные связи и др.
Yaohai Bio-Pharma предлагает услуги анализа пептидного картирования вашего целевого белка с помощью ЖХ-МС, чтобы ускорить ваши исследования структуры белка.
Мы принимали участие в структурной характеристике белков различных крупных молекул, включая рекомбинантные субъединичные вакцины, нанотела/VHH/однодоменные антитела (sdAbs), фрагменты антител, гормоны/пептиды, цитокины, факторы роста (GF), ферменты, коллагены, и т. д.
Нормативные требования к пептидному картированию
Руководство ICHQ6B рекомендует: «Селективное фрагментирование продукта на отдельные пептиды выполняется с использованием подходящих ферментов или химических веществ, а полученные пептидные фрагменты анализируются с помощью ВЭЖХ или другой подходящей аналитической процедуры. Пептидные фрагменты следует идентифицировать, насколько это возможно, с использованием таких методов, как анализ аминокислотного состава, N-концевое секвенирование или масс-спектрометрия (МС). Пептидное картирование активного вещества или лекарственного препарата (ЛП) с использованием проверенного метода — это метод, который часто используется для подтверждения желаемой структуры продукта для выпуска серии».
Аналитические методы
| Анализ |
методы |
| Картирование пептидов |
Протеазное расщепление и жидкостная хроматография-масс-спектрометрия (ЖХ-МС) |
Аналитическая процедура
1. Восстановление и алкилирование.
Цель состоит в том, чтобы уменьшить дисульфидные мостики и заблокировать образующийся свободный тиол. Уменьшение дисульфидных мостиков помогает раскрыть структуру белка, что делает протеолитическое переваривание более эффективным. На этом этапе также разрушаются мостики между цепями в случае многоцепочечных белков, которые имеют дисульфидные мостики, соединяющие цепи (например, моноклональные антитела, моноклональные антитела).
2. Переваривание белка с помощью ферментов.
Цель состоит в том, чтобы расщепить белок на пептиды. Мы выбрали ферменты на основе теоретической последовательности белка и знаний о теоретическом переваривании белка ферментами. Выбор ферментов таким образом должен привести к лучшему анализу пептидного картирования.
3. Анализ переваренных пептидов Использование высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой в режиме онлайн с ультрафиолетовым (УФ) и масс-спектрометрическим детектором с электрораспылением (LC/ES-MS).
Разделение пептидов на основе полярности с использованием ЖХ (обратно-фазовая ЖХ)
Когда пептид элюируется из колонки ЖХ, масс-спектрометр генерирует информацию о массе вместе с информацией о фрагментных ионах, что позволяет нам определить информацию о последовательности. Мы используем информацию о последовательности для подтверждения идентичности пептида и предоставления первичной информации.
Мы также можем генерировать информацию о фрагментации пептидов, когда они поступают в источник масс-спектрометра из колонки ЖХ. В зависимости от требований исследования это либо селективная ЖХ-МС/МС, либо неселективная, которую можно рассматривать как разновидность тандемной МС.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕТ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
