Yaohai Bio-Pharma предлагает услуги по тестированию N-концевых последовательностей и анализу данных на основе жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС) или метода деградации Эдмана, который позволяет определять аминокислоты на соответствующих концах интересующего белка. N-концевую модификацию также можно анализировать с помощью ЖХ-МС.
Мы принимали участие в структурной характеристике белков различных крупных молекул, включая рекомбинантные субъединичные вакцины, нанотела/VHH/однодоменные антитела (sdAbs), фрагменты антител, гормоны/пептиды, цитокины, факторы роста (GF), ферменты, коллагены, и т. д.
Нормативные требования к секвенированию N-конца
Согласно рекомендациям ICH Q6B, необходимо подтвердить последовательность вашего белка и проверить концы на предмет любых возможных вариаций.
Методы N-концевого секвенирования
Анализ |
Способ доставки |
N-концевое секвенирование |
Деградация по Эдману, жидкостная хроматография-масс-спектрометрия (ЖХ-МС) |
Процедуры
ЖХ-МС
1. Белковая N-концевая флуоресцентная маркировка
2. Множественное переваривание
3. Анализ ЖХ-МС/масс-спектрометрии (МС).
Деградация Эдмана
1. Электрофорез целевого белка в геле с додецилсульфатом натрия (SDS).
2. Перенос геля на мембраны из поливинилиденфторида (ПВДФ) и окрашивание.
3. Определить и разрезать целевую белковую полосу.
4. Секвенирование Эдмана N-конца
5. Анализ данных