Занятость сайта N-гликозилирования является физиологической особенностью гликопротеинов и в основном приводит к образованию N-гликана. Служба анализа занятости сайта N-гликозилирования компании Yaohai Bio-Pharma осуществляется посредством расщепления, высвобождения, обогащения и анализа с использованием жидкостной хроматографии-ионизационной масс-спектрометрии-масс-спектрометрии с электрораспылением (LC-ESI-MS/MS).
Мы принимали участие в структурной характеристике белков различных крупных молекул, включая рекомбинантные субъединичные вакцины, нанотела/VHH/однодоменные антитела (sdAbs), фрагменты антител, гормоны/пептиды, цитокины, факторы роста (GF), ферменты, коллагены, и т. д.
Нормативные требования к заполнению сайта N-гликозилирования
Согласно рекомендациям ICH Q6B, «для гликопротеинов определяют содержание углеводов (нейтральных сахаров, аминосахаров и сиаловых кислот). Кроме того, в максимально возможной степени анализируются структура углеводных цепей, структура олигосахаридов (антенный профиль) и сайт(ы) гликозилирования полипептидной цепи».
Аналитический метод
| Анализ |
методы |
| Занятость сайта N-гликозилирования |
ЖХ-МС после расщепления дегликозилазой и протеазой |
Процедуры
1. Расщепление белков с образованием небольших пептидных фрагментов.
2. Высвобождение N-гликанов с помощью эндогликозидазы H или PNGазы F. Эндогликозидаза H расщепляет связь между двумя остатками GlcNAc в ядре N-связанных гликанов, тогда как PNGаза F представляет собой гликоамидазу, которая разрывает связь между GlcNAc и Asn, высвобождая весь сахарной цепи и превращения Asn в Asp с увеличением массы на 1 Да.
3. Обогащение N-гликопептидов с помощью HILIC (жидкостная хроматография гидрофильного взаимодействия)
4. Анализ занятости сайта N-связанного гликозилирования с использованием LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕТ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
