Профилирование N-гликанов имеет важное значение для производства биофармацевтических препаратов. Yaohai Bio-Pharma предоставляет услуги по профилированию N-гликанов с использованием жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС) высвобожденных и меченных гликанов. Общие этапы подготовки образца N-гликанов включают расщепление гликопротеина (GP), дегликозилирование, очистку, мечение/дериватизацию и твердофазную экстракцию (SPE).
Мы принимали участие в структурной характеристике белков различных крупных молекул, включая рекомбинантные субъединичные вакцины, нанотела/VHH/однодоменные антитела (sdAbs), фрагменты антител, гормоны/пептиды, цитокины, факторы роста (GF), ферменты, коллагены, и т. д.
Нормативные требования к профилированию N-гликанов
Согласно рекомендациям ICH Q6B, «для гликопротеинов определяют содержание углеводов (нейтральных сахаров, аминосахаров и сиаловых кислот). Кроме того, насколько это возможно, анализируются структура углеводных цепей, структура олигосахаридов (антенный профиль) и сайт(ы) гликозилирования полипептидной цепи.
Аналитический метод
| Анализ |
методы |
| Профилирование N-гликанов |
Жидкостная хроматография-масс-спектрометрия (ЖХ-МС) анализ высвобожденных и меченых гликанов |
Процедуры
1. Ферментативное высвобождение гликанов с помощью пептида N-гликозидазы F (PNGase F).
2. Дериватизация высвободившихся гликанов 2-аминобензамидом (2-AB).
3. Очистка собранных N-гликанов на колонке ТСК Амид - 80 при наличии большого количества детергентов, нелетучих солей или материалов со свободными аминогруппами.
4. Мечение флуоресцентным 2-аминобензамидом (2-AB)
5. ЖХ-МС анализ меченых N-гликанов.
6. Анализ данных
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕТ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
