Профилирование N-гликанов является важным для производства биофармацевтических препаратов. Yaohai Bio-Pharma предоставляет услугу профилирования N-гликанов с использованием жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (LC-MS) освобожденных и маркированных гликанов. Общие шаги подготовки образца N-гликанов включают расщепление гликопротеина (GP), дегликозилирование, очистку, маркировку/дериватизацию и извлечение на твердой фазе (SPE).
Мы принимали участие в характеристиках структуры белков различных крупных молекул, включая рекомбинантные субъединичные вакцины, нанотеллы/VHHs/однодоменные антитела (sdAbs), фрагменты антител, гормоны/пептиды, цитокины, факторы роста (GF), ферменты, коллагены и т.д.
Регуляторные требования для профилирования N-гликанов
Согласно руководству ICH Q6B, «для гликопротеинов определяется углеводное содержание (нейтральные сахара, аминосахара и сиалиновые кислоты). Кроме того, структура углеводных цепей, паттерн олигосахаридов (антенарный профиль) и места гликозилирования полипептидной цепи анализируются насколько это возможно.
Аналитический метод
| Анализ |
Методы |
| Профилирование N-гликанов |
Жидкостная хроматография-масс-спектрометрия (LC-MS) анализа высвобожденных и маркированных гликанов |
Процедуры
1. Энзиматическое высвобождение гликанов с помощью Пептид N-Гликозидазы F (PNGase F)
2. Дериватизация высвобожденных гликанов 2-аминофениламидом (2-AB)
3. Очистка собранных N-гликанов на колонке TSK Amide - 80, если присутствуют большие количества моющих средств, неволатильных солей или веществ с свободными аминогруппами
4. Маркировка флуоресцентным 2-аминофениламидом (2-AB)
5. LC-MS анализ помеченных N-гликанов
6. Анализ данных
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
