Значимость разработки процессов в downstream (DSP)
Весь ферментационный бульон содержит целевой белок или плазмиду, а также продукт- и процесс-связанные примеси, например, агрегаты, микробные клеточные субстраты, белки клеток хозяина (HCP), ДНК клеток хозяина (HCD), эндотоксины и антибиотики.
Поэтому ключевым является проектирование эффективного DSP, процесса очистки, для удаления определенных примесей и производства высокоочищенного и высококачественного лекарственного вещества. Кроме того, оптимизация процесса очистки может способствовать увеличению выхода продукта, снижению затрат и улучшению масштабируемости и воспроизводимости процесса.
Ключевые слова: разработка процесса, оптимизация и валидация, процесс очистки, хроматография, удаление примесей, удаление HCP, удаление HCD, удаление эндотоксинов, денатурация и рефолдинг белков, сборка VLP, конъюгирование
Применение: биофармацевтическая промышленность, медицина для человека, ветеринария, вакцины, рекомбинантные крупные молекулы биологических препаратов, рекомбинантные биопрепараты, биологические реактивы
Решения DSP от Yaohai Bio-Pharma
У нас есть обширный опыт изоляции целевых белков или плазмид из сложных матриц путем разработки и оптимизации процесса очистки на последующих этапах. Существуют различные типы операций, подходящих для очистки биопрепаратов, включая центрифугирование, фильтрацию, гомогенизацию, щелочное лизе, ультрафильтрацию, осаждение, денатурацию белка и его реформирование, хроматографию и т.д.
Наши доступные услуги по разработке очистки включают:
- Разработка всего процесса очистки от сбора клеток или супернатанта до получения конечного активного вещества.
- Оптимизация процесса очистки с учетом примесей, связанных с продуктом и процессом, для повышения качества и безопасности продукта, например, ОФП, ОФД, эндотоксин.
- Определение и оптимизация ключевых параметров в одной или нескольких операциях, включая лизис клеток, тангенциальную потоковую фильтрацию, отбор сорбентов, хроматографию, денатурацию и рефолдинг белков и т.д.
- Оптимизация процесса с точки зрения качества, выхода, восстановления, стоимости и масштабируемости.
- Валидация процесса очистки на этапе производства.
- Оценка диапазона параметров на основе рисков и проектирование экспериментов (DoE) в моделировании процесса.
Детали услуги
Стандартизированные платформы очистки белков или плазмид основаны на нескольких грубых этапах очистки и менее чем на 4 этапах хроматографии, включая захват, промежуточную очистку и доводку до кондиции.
| Детали услуги |
Операционные единицы |
Параметры |
| Грубая очистка |
Центрифугирование |
Скорость вращения, Время |
| Высокодавленное гомогенизирование |
Общий твёрдый остаток, Давление, Циклы |
| Непрерывный щелочной лизис |
Соотношение подвешенных клеток к раствору лизиса, Время лизиса |
| Касательное потоковое фильтрование |
Материал мембраны и размер пор, Скорость подачи фид-потока, Трансмембранный перепад давления (TMP), Отношение объёма фильтрата к площади мембраны |
| Осадка |
Тип и концентрация осадителя, Аддитив, pH, Температура, Время |
| Денатурация и рефолдинг |
Солюбилизация белков инклюзионных телец |
Концентрация денатуранта (например, Уреа, Гуанидин HCl, Сильный ионный моющий агент), Моющие агенты (например, Содиевый додецилсульфат, SDS), Редуцирующие агенты (например, Дитиотреитол, DTT), Хелатирующие агенты (Этлендиаминтетрауксусная кислота, EDTA), Температура, Время |
| Перескладывание белка |
Методы перескладывания (разбавление, диализ или перескладывание с помощью ХВС), Концентрации белков, Буферы, pH, Температура, Время, Окисляющие и восстанавливающие агенты (например, глутатион, GSH/Оксидированный глутатион, GSSH, DTT/GSSH, Цистеин/Цистин), Малые молекулярные добавки (L-аргинин, Уреа, Гуанидин/HCl, Поверхностно-активные вещества) |
| Захват, Промежуточная очистка и Полировка |
ХВ (Афинная хроматография) |
Несколько типов хроматографической смолы/колонки (например, ХВ, ИЭХ, ГВ, ХВС, ОФХ, СХ), Длина и диаметр колонки, Состав буфера, Объем инъекции, Состав подвижной фазы (сорбция и десорбция), pH, Скорость потока, Условия связывания, промывки и элюирования. |
| ИЭХ (Анионообменная или катионообменная хроматография) |
| ГВ (Гидрофобная взаимодействие хроматография) |
| Десолирование и/или размерно-исключающая хроматография (ХВС) |
| ОФХ (Обратно-фазовая хроматография) |
| СХ, Смешанная режим хроматография |
Изучение кейса
Случай 1
Нам поручено разработать и оптимизировать процесс очистки после биосинтеза для повышения чистоты белка с 85% до 90%, при этом уменьшая количество этапов хроматографии.
Yaohai предоставил надежный и масштабируемый процесс очистки, включающий три этапа хроматографии для целевого белка, бактериального аллергена. Итоговая чистота достигла 95%.
Случай 2
Yaohai была назначена нашим клиентом для оптимизации процесса удаления эндотоксинов из вирусоподобных частиц (VLP) вакцины.
Наша команда провела оптимизацию параметров хроматографии и подготовила лекарственное вещество с чистотой 98% и остаточным содержанием эндотоксинов 12.8EU/мг.
Наш опыт
- Мы принимали участие в разработке и производстве различных крупных молекул, включая рекомбинантные субъединичные вакцины, ВЧЧ, гормоны (инсулин, GLP-1, гормон роста), цитокины (Интерлейкин-2/IL-2, IL-15, IL-21), факторы роста (EGF, FGF, NGF), нанотеллы/однодоменные антитела (sdAbs), ферменты и т.д.
Оборудование
Мы используем отраслевые лидеры AKTA Pure, AKTA Avant и подготовительные системы HPLC для выполнения различных методов хроматографии, включая аффинную, ионную обменную, гидрофобное взаимодействие, обратную фазу и хроматографию размерного исключения.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
