При рекомбинантных белках часто наблюдается окисление открытых боковых цепей аминокислот, таких как триптофан (Trp) и метионин (Met), что изменяет физико-химические свойства белков. Эти изменения могут, в свою очередь, привести к изменению биологических функций пораженных белков, например, потере связывания, снижению ферментативной активности, неожиданно быстрому выведению. Белки являются важными мишенями для окислительных реакций, так как они быстро реагируют с окислителями и обильны в клетках, внеклеточных тканях и биологических жидкостях.
Следовательно, мониторинг окисления белков критически важен для успешного развития биофармацевтических препаратов.
Yaohai Bio-Pharma предлагает услугу анализа окисления аминокислот, которая позволяет определять окисление аминокислот методом жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (LC-MS).
Мы занимались структурной характеристикой белков различных крупных молекул, включая рекомбинантные субъединичные вакцины, нанотеллы/ VHHs/ однообластные антитела (sdAbs), фрагменты антител, гормоны/пептиды, цитокины, факторы роста (GF), ферменты, коллагены и т.д.
Регуляторные требования к окислению аминокислот
Согласно руководству ICH Q6B, окисленные формы могут быть обнаружены и характеризованы хроматографическими, электрофоретическими и/или другими соответствующими аналитическими методами (например, высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), капиллярная электрофорез, масс-спектрометрия, круговая дихроизм).
Аналитические методы
| Анализ |
Методы |
| Окисление аминокислот |
ЖК-МС, обратнофазовая высокоэффективная жидкостная хроматография (ОФ-ВЭЖХ) или высокоэффективная жидкостная хроматография с гидрофобным взаимодействием (ГВ-ВЭЖХ) и масс-спектрометрия |
Аналитические процедуры
1. Подготовка образца
2. ЖК-МС
3. Анализ данных
Остатки триптофана (Trp) особенно подвержены окислению из-за высокой реакционной способности ароматического индольного кольца с реагентами, содержащими активный кислород. Окисление Trp требует некоторой экспозиции остатков Trp, которые обычно находятся внутри трёхмерной структуры белка.
Однако, когда остатки Trp окисляются, они могут превращаться в различные продукты, обладающие свойствами, сильно отличающимися от исходных свойств Trp. Наиболее распространённым путём окисления Trp является образование N-формилкинурина (Разница в массе: +32).
Другой часто окисляемой аминокислотой является метионин. Атом серы в остатке Met может принять один или два атома кислорода, что приводит к образованию сульфоксида (Разница в массе: +16) или сульфона (Разница в массе: +32), соответственно. Данная модификация относительно распространена из-за высокой степени экспозиции Met на поверхности.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
