Деамидация боковых цепей глутамина и аспарагина является распространенной модификацией с точки зрения влияния на свойства белковых биофармацевтических препаратов. Деамидация может происходить в остатках глутамина, но обычно с гораздо меньшей скоростью. Скорости деамидации зависят от температуры, pH, локальной структуры белка и соседних аминокислотных остатков.
Yaohai BioPharma предлагает услугу по тестированию деамидации аминокислот, которая позволяет выявить деамидацию аминокислот с помощью жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (LC-MS).
Мы участвовали в karakterизации структуры белков различных крупных молекул, включая рекомбинантные субъединичные вакцины, нанотеллы/ВНН/однодоменные антитела (sdAbs), фрагменты антител, гормоны/пептиды, цитокины, факторы роста (CF), ферменты, коллагены и т.д.
Регуляторные требования к деамидации аминокислот
Согласно руководству ICH Q6B, дезамидированные формы могут быть обнаружены и характеризованы хроматографическими, электрофоретическими и/или другими релевантными аналитическими методами.
Аналитические методы
| Анализ |
Методы |
| Деамидация |
Жидкостная хроматография-масс-спектрометрия (LC-MS) |
Процедуры
например, дезамидация аспартата
1. Ферментативное расщепление
2. LC-MS при условиях высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC)
3. Анализ данных
Дезамидация аспарагина происходит через промежуточный сукцинимид (Suc), который подвержен рацемизации и гидролизу, что приводит к образованию четырех изомеров Асп, включая L-Асп, L-Изоасп, D-Асп и D-Изоасп.
Теоретически, дезамидация глутамина может привести к образованию четырех соответствующих изомеров глутамата через процесс, аналогичный дезамидации аспарагина.
Масс-спектрометрия высокого разрешения легко идентифицирует разницу в массе 1 да между пептидами, содержащими Asn/Gln, и их соответствующими деамидированными аналогами Asp/Glu.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
