In vitro mRNA sintezė
Pagrindiniai mRNA sudedamieji yra 5’-kapa, 5’-UTR, atvirojo skaitmeninio rinkmenos (ORF), 5’-UTR ir 5’ poli A uodega, kurie yra būtini dėl mRNA funkcijų palaikymo. Tyrinėjai naudojo įvairias metodus, kad nustatytų ir optimizuotų mRNA sekuas ir struktūras.
MRNA sintezė atliekama remiantis in vitro transkripcija (IVT), naudojant tiesines DNA šablonus, RNA polimerazas (T3, T7 arba SP6), nekeistus arba modifikuotus nukleotidus, enzymus ir tinkamus reagentus.
5’ Kapo modifikacija
Sekos išaugusiojo mRNA iš eukarioto rodosi 7-metilguanozino (m7G) kapas 5’ galą, kuris pagerina mRNA stabilumą ir vertimo efektyvumą. Yra du bendri būdai, kaip in vitro fiksuoti mRNA. Pirmiausia, mRNA gali būti apversta kartu su in vitro transkripcija, pridėjus apverstumo analogą m7GpppG struktūros (pvz., CleanCap) prie IVT sistemos. Šis ko-transkripcinis apverstumo metodas teikia natūralią 5' kapsulės struktūrą ir padidina apverstumo efektyvumą iki maždaug 90-99%. Antra, mRNA žymėjimas taip pat gali būti atliktas naudojant žymėjimo enzymų reakcijas po in vitro transkripcijos reakcijos.
PolyA modifikacija
Poly(A) uodega taip pat ilgiai mato mRNA pusės gyvavimo laiką organizme ir pagerina mRNA tradukavimo efektyvumą. Sukauptos poly(A) uodegos ilgis turėtų būti 100–300 nukleotidai. Be to, modifikuotas adenozinas didina poly A uodegos stabilumą prieš ląstelinių RNazės degradaciją. Poly A uodega gali būti įterpta in vitro transkripcijos metu naudojant DNA šabloną, kuriame yra koduojama poly A seka, todėl gaunamas tam tikras poly A sekos ilgis. Taip pat galima naudoti rekombinantinę poly A polimerazę enzymine polyadeniliacijai po mRNA transkripcijos.
Nukleotidų modifikacija
Modifikuoti nukleozidai gali sutrikdyti šablonų pripažinimo receptorių (PRR) pripažinimą ir/arba aktyvavimą bei stiprinti mRNA vakcinų veiksmingumą dviejomis visiškai skirtingomis būdais. Kiekiamų chemiškai modifikuotų nukleozidų, įskaitant pseudouridylinę (ψ), 1-metilpseudouridylinę (m1ψ), tiouridylinę (s4U) ir 5-metilcitozinę (m5C), pridėjimas gali užkirsti kelią TLR7/8 ir kitų gimtųjų imuninių receptorių aktyvacijai, kas didelėmis dalimišiais sumažina mRNA imunogenicumą.
mRNA perdavimo sistema
Norint išlaikyti mRNA funkciją, ji turi patekti į gausies citoplazmą ir išreikšti specifinius antigenus. Vienas iš sudėtingiausių iššūkių, su kuriu susiduria mRNA vakcinos ir terapijos, yra mRNA patekimas į tikslines ląstelas su pakankamai aukštais vertimų lygiais, o tai reikalauja labai specifiškų ir efektyvių mRNA perdavimo sistemų. Buvo sukurtos ir naudojamos kelios mRNA perdavimo vektoriai, įskaitant dendritinius ląstelės (DCs), protaminą, kationiškus polimerus ir kationiškus liposomas.
Kompleksai iš kationinių lipidų su mRNA ir kitomis priemonėmis gali kartu sudaryti 80-200 nm dydžio nanodaleles, vadinamas lipidiniais nanodalelėmis (LNPs). Kaip vienas iš geriausių mRNA perdavimo sistemų, LNP apima ionizuojančius kationinius lipidus, natūralius fosfolipidus, cholesterolį ir polietileną glicoli (PEG). Keli RNA vakcinos ir terapijos (siRNA ir mRNA), patvirtintos JAV Maisto ir Gero Administracija, pagrįstos LNP perdavimo sistemomis.
Yaohai Bio-Pharma Siūlo Viso Viename Vietoje Sprendimą RNA
Pasirinktiniai Pateikiami Rezultatai
|
Klasė
|
Pateikiami rezultatai
|
Specifikacija
|
Paraiškos
|
|
ne-GMP
|
Vaistinis medžiaga, mRNA
|
0,1~10 mg (mRNA)
|
Priesklinikinė tyrime, pvz., ląstelės transfekcija, Analizinės metodų kūrimas, Ankstyvi stabilumo tyrimai, Formulacijos kūrimas
|
|
Vaistinis produktas, LNP-mRNA
|
|
GMP, Sterilitetas
|
Vaistinis medžiaga, mRNA
|
10 mg~70 g
|
Tyrimo naujojo vaisto (IND) registravimas, Klinikinių bandymų leidimas (CTA), Klinikinių tyrimų tiekimai, Biologinių gaminių licencijavimo (BLA) prašymas, Komercinis tiekimas
|
|
Vaistinis produktas, LNP-mRNA
|
5000 butelių arba priešpildytų šonu / kartridžių
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
