MRNR sintezė in vitro
Pagrindiniai mRNR komponentai yra 5'-dangtelis, 5'-UTR, atviras skaitymo rėmelis (ORF), 5'-UTR ir 5'-poli A uodega, kurios yra būtinos palaikant mRNR funkciją. Mokslininkai naudojo įvairius metodus, kad nustatytų ir optimizuotų mRNR sekas ir struktūras.
iRNR sintezė atliekama in vitro transkripto (IVT) pagrindu, naudojant linijinius DNR šablonus, RNR polimerazes (T3, T7 arba SP6), nemodifikuotus arba modifikuotus nukleotidus, fermentus ir atitinkamus reagentus.
5' dangtelio modifikacija
Subrendusios eukariocitų mRNR sekos 7' gale rodo 7-metilguanozino (m5G) dangtelį, kuris pagerina mRNR stabilumą ir transliacijos efektyvumą. Yra du bendrieji mRNR surinkimo in vitro metodai. Pirma, mRNR gali būti uždengta kartu su in vitro transkriptu, pridedant m7GpppG struktūros dangtelio analogą (pvz., CleanCap) į IVT sistemą. Šis bendro transkripcijos uždengimo metodas suteikia natūralią 5 colių kapsulės struktūrą ir padidina uždengimo efektyvumą iki beveik 90–99%. Antra, mRNR kartografavimas taip pat gali būti atliktas kartografuojant fermentų reakcijas po in vitro transkripcijos reakcijos.
PolyA modifikacija
Poli (A) uodega taip pat prailgina mRNR pusinės eliminacijos laiką in vivo ir pagerina mRNR transliacijos efektyvumą. Pastiprintos poli(A) uodegos ilgis turi būti 100-300 nukleotidų. Be to, modifikuotas adenozinas padidina poli A uodegos stabilumą prieš ląstelių RNazės skaidymą. Poli A uodega gali būti įterpta atliekant in vitro transkripciją, naudojant DNR šabloną, koduojantį poli A, taip gaunamas specifinis poli A sekos ilgis. Rekombinantinė poli A polimerazė taip pat gali būti naudojama atliekant fermentinį poliadenilinimą po mRNR transkripcijos.
Nukleotidų modifikavimas
Modifikuoti nukleozidai gali slopinti modelio atpažinimo receptorių (PRR) atpažinimą ir (arba) aktyvavimą ir sustiprinti mRNR vakcinų veiksmingumą dviem visiškai skirtingais būdais. Kai kurių chemiškai modifikuotų nukleozidų, įskaitant pseudouridiną (ψ), 1-metilpseudouridiną (m1ψ), tiouridiną (s4U) ir 5-metilcitoziną (m5C), pridėjimas gali užkirsti kelią TLR7/8 ir kitų įgimtų imuninių receptorių aktyvacijai, o tai žymiai sumažina imunogeniškumą. mRNR.
mRNR pristatymo sistema
Kad palaikytų mRNR funkciją, ji turi patekti į šeimininko citoplazmą ir ekspresuoti specifinius antigenus. Vienas iš sunkiausių iššūkių, su kuriuo susiduria mRNR vakcinos ir terapijos, yra mRNR pristatymas į tikslines ląsteles su pakankamai aukštu transliacijos lygiu, todėl tam reikia labai specifinių ir veiksmingų mRNR tiekimo sistemų. Buvo sukurti ir naudojami keli mRNR tiekimo vektoriai, įskaitant dendritines ląsteles (DC), protaminą, katijoninius polimerus ir katijonines liposomas.
Katijoninių lipidų kompleksai su mRNR ir kitais preparatais kartu gali sudaryti 80–200 nm dydžio nanodaleles, pavadintas lipidų nanodalelėmis (LNP). Kaip viena iš pažangiausių mRNR tiekimo sistemų, LNP apima jonizuojamus katijoninius lipidus, natūralius fosfolipidus, cholesterolį ir polietilenglikolį (PEG). Keletas RNR vakcinų ir terapijų (siRNR ir mRNR), patvirtintų JAV maisto ir vaistų administracijos, yra pagrįstos LNP tiekimo sistemomis.
„Yaohai Bio-Pharma“ siūlo „vieno langelio“ sprendimą RNR
Individualūs pristatymai
|
Klasė
|
Pristatomos
|
detalizavimas
|
Programos
|
|
ne GMP
|
Vaistinė medžiaga, mRNR
|
0.1–10 mg (mRNR)
|
Ikiklinikiniai tyrimai, pvz., ląstelių transfekcija, analitinio metodo kūrimas, ikistabilumo tyrimai, preparatų kūrimas
|
|
Vaisto produktas, LNP-mRNR
|
|
GMP, sterilumas
|
Vaistinė medžiaga, mRNR
|
10 mg ~ 70 g
|
Naujas tiriamasis vaistas (IND), klinikinių tyrimų leidimas (CTA), klinikinių tyrimų tiekimas, biologinės licencijos paraiška (BLA), komercinis tiekimas
|
|
Vaisto produktas, LNP-mRNR
|
5000 buteliukų arba užpildytų švirkštų/užtaisų
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
