mRNA plačiai naudojama tyrime dėl geno ar baltymo funkcijų. Kartu ji yra paplitusi gydomųjų ir profilaktinių biologinių medžiagų kūrimo metu. Kaip bendras RNA molekulių sintezės metodas, in vitro transkripcija (IVT) leidžia efektyviai gauti individualizuotus transkriptus.
Yaohai Bio-Pharma sukūrė rinkinį mRNA sintezės technologijų, skirtų teikti aukštos kokybės RNA, tokios kaip sekcijų dizainas ir optimizavimas, IVT, šalinimas, lieravimas ir lipidinių nanodalelių (LNP) inkapsuliacija. Visi produktai išleidžiami pagal griežtas kokybės kontrolės (QC) standartus.
Su 2020 m. COVID-19 pandemijos išsiskyrimu, mRNA technologija pažengė didžiuliais žingsniais, o jos susijusios tyrimai ir programos gavo nepripažintą vystymąsi, įskaitant infekcinės ligos prevencijos profilaktinius vakcinos, terapiškus onkologijos vakcinus ir vaistus, rakinio gydymą, baltymų pakeitimo terapiją, regeneracinę mediciną ir ląstelės bei genų terapiją (CGT).
mRNA vakcina | mRNA Terapijos |
|
Procesas | Neprivalomas Paslauga | Paslaugų detalės | Pristatymo Laikotarpis (darbo diena) | Pateikiamas Produktas |
mRNA Sekos Dizainas ir Optimalizavimas | Kodujančių seku dizainas ir optimalizavimas | CDS sekos dizainas ir kodono optimalizavimas | 1-3 | Sekos failas |
Nenuklizinio sekų projektavimas ir optimizavimas | UTR, poliA sekuų projektavimas ir optimizavimas | |||
Transkripcijos šabloninio plazmidinio preparavimas | Rekombinantinio plazmidinio preparavimas | Geno sintezė | 7-10 | |
Plazmidinio pagarsinimas ir ištraukimas | 4 | |||
Plazmidinio linearizavimas ir purifikavimas | ||||
mRNA in vitro transkripcija | Kopiniškas apverčimas (vienetinis metodas) | In vitro transkripcija (IVT) / Kapo analogas | 1-2 | N/a |
Nukleotido modifikacijos (UTP/CTP modifikacijos) | ||||
DNA šablono pašalinimas (DNase I) | ||||
Enzimatinių kapavimo (dviejų etapų procesas) | IVT | 2-3 | ||
Nukleotido modifikacijos (UTP/CTP modifikacijos) | ||||
DNA šablono pašalinimas (DNase I) | ||||
mRNA šalinimas (lietuvo chloridas/magnetiniai kauliukai) | ||||
Enzimatinis kapavimas | ||||
mRNA atskyrimas | Konvencinė ištraukos schema | Lietuvo chlorido krūvinis | 1 | mRNA gydybinis medžiaga |
Magnetinių kauliukų ištrauka | ||||
Kromatografijos stulpelio suvalymo shema | Kelių kromatografijos metodų derinys | 1-2 | ||
Buferio keitimas | Ultrafiltracija | 1 | ||
mRNA liofilizavimas | Liofilizavimas | Iš anksto šaldymas | 2-3 | mRNA liofilizuotas priedas |
Pirmasis sausinimas (sublimacija) | ||||
Antrasis sausinimas (desorcija) | ||||
mRNA inkapsuliacija | LNP suoblinkimas | LNP suoblinkimas | 2-3 | mRNA-LNP vaistinis produktas |
Konscentracija ir buferio keitimas | ||||
mRNA kokybės analizė | mRNA gyvybinis medžiaga / liotinamas priedas | Konscentracija, drabužių švarumas | 1 | TESTAVIMO ATASKAITA |
Integritetas, apdengimo efektyvumas, polyA uodegos skirstymas | 2-5 | |||
mRNA-LNP gyvybinis produktas | Apdengimo efektyvumas | 1 | ||
Dalinys dydis ir skirstymas | ||||
Viršulinis krūvis | ||||
mRNA išraiškos patvirtinimas | 293T ląstelės vertinimas | Ląstelių platinimas | 4 | |
Trūkiojo transfekcija ląstelėms | ||||
Fluorescentinio signalo stebėjimas | 1-3 | |||
Western blot (WB) / Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) |
5' Kapas |
▪ Be kapo ▪ Cap0, bendrai sukapintas ▪ Cap1, bendrai sukapintas ▪ Kapavimas1, enzymatinis kapavimas |
5’ UTR\/3’ UTR |
▪ Gamtinis UTR seka ▪ Mutacinis\/Inžinierinis UTR seka |
3' PolyA uodega |
▪ 100A ~120A uodega (rekomenduojama) ▪ Segmentuota polyA uodega ▪ Kitos tinkamos uodegos |
Modifikuoti nukleozidai |
▪ Nepakeisti bazės ▪ Pseudouridinas (Ψ) ▪ N1-Methylpseudouridinas (N1Ψ) ▪ 5-methylcitosinas (m5C) ▪ 5-methyluridinas (m5U) ▪ 5-methoxyuridinas (5moU) ▪ 2-tiouridinas (s2U) ▪ 2′-O-methyl-U ▪ Kitos modifikacijos |
Integracinis tarnybų srautas
Siūloma tarnyba nuo pradžios sekos dizaino iki galutinio mRNA paruošimo, kokybės kontrolės ir išraiškos patvirtinimo.
Tarptautinis inovacinis sekų dizaino ir optimizavimo metodas
Profesionalus mRNA sekos dizainas ir optimizavimas skatina efektyvų mRNA išsireiškimą.
Įvairios nukleotido modifikacijos
Efektyviai padidina mRNA išsireiškimą ir sumažina netinkamas mRNA imunines atsakas.
Išbandytas šalinimo platforma
Suderinti konvencinį ir patobulintą šalinimo būdą, gautos mRNA пробos su aukšta šalia.
Visapusiška kokybės kontrolės platforma
Įvairesni kokybės kontrolės variantai, kad atitiktų rutininio tyrimo reikalavimus, pvz., koncentracija, A260/280 šalia ir integritetas, bei aukštos kokybės kontrolės reikalavimus, pvz., dengimo efektyvumas/polyA pasiskirstymas.
Greitas pristatymas
Individualizuota mRNA gali būti pateikta per 7 dienas, išskyrus užsienio sekos sintezę.