Produktai, gauti in vitro ciklizacijos ir RNase R bogavimo metodu, reikalauja tolesnio šalinimo iš in vitro transkripcijos (IVT), įskaitant nebuvesius ciklizacijos reakcijoje substratus, reakcijos produktais ir sukrėstų RNA.
Yaohai Bio-Pharma turi pažangias LiCl sedimentacijos, magnetinių dregelių bogavimo, savarankiškai kurtas bogavimo technologijas ir kitas įvairias bogavimo sprendimus, kurie efektyviai šalina įvairias teršalus ir parengia aukštos rūgšties circRNA.
Bogavimo sprendimas mažoms circRNA kiekio grupėms, skirtoms ląstelėms transfekcijai ir kaip dalis gyvūnų eksperimentų.
Bogavimo sprendimas mažoms circRNA kiekio grupėms, skirtoms ląstelėms transfekcijai ir kaip dalis gyvūnų eksperimentų.
Aukštesnių reikalavimų taikymo scenarijus;
Stabilus ir eskalavimas leidžiantis bogavimo procesas, atitinkantis GMP gamybos reikalavimus.
Procesas | Neprivalomas Paslauga | Paslaugų detalės | Pristatymo laikotarpis (diena) | Pateikiami rezultatai |
circRNA šliuzinimas | Įprastas šalinimo sprendimas | Lietuvo chlorido krūvinis | 1 | circRNA medicininis medžiaga |
Magnetinių kauliukų ištrauka | ||||
Aukštosios rūgšties circRNA šalinimas | Paruoštinis aukštos našumo skilties chromatografija (HPLC) | 1-2 | ||
Buferio keitimas | Ultrafiltracija | 1 | ||
circRNA kokybės kontrolė | Konscentracija \/ suvalymas | Ultravioletinė (UV) spektrofotometrija | 0.5 | TESTAVIMO ATASKAITA |
Grynosumas | Agarino gelio elektroforezė (AGE)/E-Gel | |||
HPLC-pasirinktinai | 1 |
Galima pasiekti taikymo scenarijus.
circRNA su geresne nei 90 proc. švarumu;
Per griežtą RNazės kontrolę eksperimentinėje aplinkoje ir naudojamuose prietaisams, efektyviai prevencijuojama RNA degradacija.
Yaohai Bio-Pharma sukūrė pažangų circRNA purifikavimo sprendimą, kuris gali veiksmingai pašalinti įvairias procese susijusias dainius.
Pagal tradicinį purifikavimo metodą gauti circular RNA produktai vis dar yra aiškiai mišruojami su skilusiomis RNA ir intronais.
Po Yaohai Bio-Pharma sukurtos purifikavimo procedūros, įvairios linijinių RNA dainiai, tokie kaip skilusios RNA ir intronai, sėkmingai yra pašalinti.
circRNA išraiškos patvirtinimas
Naudojant konvencinį liposomą, pagaminta eGFP circRNA transfekuojama į 293T ląstelę, po 24 valandų stebima fluorescencijos signalas ir jis toliau stiprinauja po 48 valandų. Fluorescencijos signalas galima aptikti dar 7-osios ir 14-osios dienos po transfekcijos.