Upstream procesų kūrimo svarba
Upstream procesas (USP), taip pat vadinamas fermentacijos procesu, yra vienas iš pradinių fazės biotechnologinio apdorojimo. Mikroorganizmų fermentacijos procesas yra labai svarbus aukštos tankio ląstelių kultūrai ir išoriniam geno išraiškai, kas tiesiogiai įtakoja biomedžiagų grąžą ir kainą.
Biomedžiagų kūrimo ankstyvose stadijose (prieš klinikines ar 1/2 fazę) dėmesys sutelkiamas į mastinius gyvūnams nesantys procesus su vidutiniu grąžos lygiu ir atitinkančius visus produkto kokybės standartus.
Vėlesnių stadijų metu (3 faza ar komercinė) mes koncentruojames ant grąžos, robustumo, mastinumo ir atkuriamumo, sukurdami ekonomišką procesą. Problemos sprendžiamos procesų charakterizavimo ir procesų patvirtinimo tyrimais. Tarpinėje, kokybė pagal projektą (QbD) ir eksperimentų projektavimo (DoE) metodai dažniausiai taikomi.
Raktažodžiai: procesų kūrimas, optimizavimas ir patvirtinimas, fermentacijos procesas, mikrobinių ląstelių fermentacija, bakterijų fermentacija, gėlių fermentacija, aukštos tankio fermentacija, inžinerinai modifikuotų širasčių fermentacija
Pristatymas: biomedicinos pramonė, žmoniška medicina, gyvūnų medicina, vakcinos, rekombinantiniai dideliųjų molekulių biologiniai gaminiai, rekombinantiniai biologiniai gaminių, biologinis reagentas
Yaohai Bio-Pharma USP sprendimai
Naudojantis daugiau nei dešimtmečiu mikrobių fermentacijos patirties, Yaohai Bio-Pharma turi galimybių padėti spręsti fermentacijos proceso iššūkius. Mes galime greitai sukurti strategijas aukštai tankio fermentacijai Escherichia coli (E. coli) periplazminiam sekretavimui, vidaus dalelės tirpalumui ar įtraukos kūno išraiškai bei gėlių išoriniam arba vidaus dalelės išraiškai.
Mūsų prieinamos bendros fermentacijos plėtojimo paslaugos apima:
- Fermentacijos proceso projektavimas atliekamas mažame 7L mastelyje papildomo degens režimu
- Trejų partijų proceso patvirtinimas 7L fermentatoriuose
- Tarpinis proceso eskalavimo mastelis iki 30L/70L
Galiame lankstiai atlikti daugiausia parametrų optimizavimą, kad pasiektume pageidautinį grąžą ar proporciją, naudojant vienkartinių veiksnių metodus (OTAF) arba eksperimentų planavimo metodus (DoE).
Pagrindiniai fermentacijos parametrai yra tokie:
Fermentacijos sergalo sudėtis be gyvūnų produktų
Be antibiotikų ar ne, inoculumo tūris
Aukščio temperatūra, pH, Išsisklaidęsis deguonis (DO) lygis
Priedų pateikimo būdas (pvz., fed-batch)
Inducatoriaus koncentracija (pvz., IPTG, metanolas), Indukcijos taškas (ląstelių mokra masė/OD600),
Indukcijos temperatūra, Indukcijos laikas
ir t.t.
Paslaugų detalės
| Paslaugos |
Procesų srautas |
| Auginimas skaitmeninėje butelėje (500 mL) |
Medžiagų paruošimas be gyvūnų produktų → Mikroorganizmų sėklos auginimas → Auginimas šakinėlyje → Indukcija → Žolių surinkimas |
| Auginimas fermentatoriuje (7 L) |
Medžiagų paruošimas be gyvūnų produktų → Mikroorganizmų sėklos auginimas → Aukštos tankio ląstelių fermentacija 7L bioreaktoriuje → Indukcija → Žolių surinkimas |
| Baltymų/Peptidų kokybės kontrolė |
Pretreatment Intracelinis išsisklaidęs reiškinys: Mikroorganizmų ląstelių žolių ir iš naujo susprendinimo procedūra → Ultragarso smegenimas → Ląstelių dalelių pašalinimas → Paprastasis ištraukimas Inkluzinių kūnų reiškinys: Mikroorganizmų ląstelių žolių ir iš naujo susprendinimo procedūra → Ultragarso smegenimas → Inkluzinių kūnų paruošimas → Paprastasis ištraukimas Ekstracelinis išsisklaidęs reiškinys: Kultūros supernatanto rinkimas → Koncentracija ir buferio keitimas → Paprastasis ištraukimas Kokybės analizė: Paprastasis ištraukimas kaip imtis → Tikslo baltymo analizė SDS PAGE arba Western blotting (WB) metodu |
| Plazmino kokybės kontrolė |
Pretreatment ir kokybės analizė Plazmidų ištraukimas → DNA analizė agarovo gėlio elektroforeze |
Praktinis pavyzdys
Mūsų klientas užsakė padidinti tikslinio polipeptido hormono gamybos kiekį iš 8 g/L iki 10 g/L.
Remiantis Pilnu Faktorių Modeliu ir Atsakymo Paviršiaus Modeliu iš DoE įrankių, mes greitai atpažijome ir optimizavome pagrindinius fermentacijos parametrus. Optimizuotoje aukštos ląstelių tankio fermentacijos procese išraiškos lygis padidėjo iki 10 g/L.
Mūsų patirtis
- Dirbome su įvairiais mikroorganizmų giminėmis, pavyzdžiui, E.Coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; Pichia pastoris (P. pastoris) SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink rūšis 1/2/3/4; Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) ir Hansenula polymorpha (H. polymorpha) .
- Mes turime patirties E. coli periplazminiuose sekretorijuje, šviežiamųjų ir inkluzinių kūno išraiškoje, taip pat grybų intracelulinėje arba ekstracelulinėje išraiškoje. Inkluzinių kūnų grąžas siekia iki 10g/L, o šviežiojo baltymo grąžas kinta nuo 0,5 iki 15g/L.
- Mes esame įsitraukę į skirtingų didelių molekulių kūrimą ir gamybą, įskaitant rekombinantinius subvieneto vakcinus, virusinio panašumo daleles (VLP), hormonus (insulinas, GLP-1, augimo hormonas), citokinus (Interleukinas-2/IL-2, IL-15, IL-21), augimo veiksnius (EGF, FGF, NGF), nanotiklius/pavienetinius domeninius antikūrus (sdAbs), enzymus ir kt.
- Įrenginiai
7L*16 Fermentacijos sistema
Cedex Bio analizatorius, Bioprocesų analizatorius
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
