Duomenys apie peptidų žemėlapius, gauti naudojant skaitmeninę skysčio chromatografiją su masės spektrometriu (LC-MS), teiks daug informacijos apie pirminę ir aukštesnių eilių struktūrą natyviniams ir rekombinantiniams baltymams, įskaitant aminorūgščių sekožungį, po paverstinio modifikavimą (PTM, pvz., glikozaciją, oksidaciją, deamidaciją), disulfidinius junginius ir kt.
Yaohai Bio-Pharma siūlo peptidų žemėlapių analizės paslaugas jūsų tiksliniam baltymui naudojant LC-MS, kad paaukštintų jūsų tyrimus dėl baltymo struktūros.
Mes esame įsitraukę į įvairių didelių molekulių, įskaitant rekombinantinius subvieninius vakcinos, nanotiklius/VHHs/ vienvietinius antikūno kūnus (sdAbs), antikūno fragmentus, hormonus/peptidus, citokinus, augimo veiksnius (GF), enzymus, kolagenus ir kt., baltymų struktūrinę charakteristiką.
Reguliuojamos reikalavimai dėl peptidų žemėlapių
ICHQ6B rekomendacijos teigia: „Pasirinktinis produkto fragmentavimas į atskirus peptidus vykdomas naudojant tinkamus enzymus ar chemikalus, o gauti peptido fragmentai analizuojami HPLC arba kitomis tinkamomis analizinėmis procedūromis. Peptido fragmentai turėtų būti identifikuojami kaip galima daugiau naudojant technikas, tokias kaip aminorūgščių sudėties analizė, N-galvos sekų nustatymas ar masės spektrometriją (MS). Aktyviosios medžiagos arba vaistinio produkto (DP) peptidinis žemėlapis, kuris sukuriamas naudojant tinkamai patvirtintą metodą, yra metodas, dažnai naudojamas norint patvirtinti pageidaujamą produktų struktūrą partijos leidimui.“
Analizinės metodai
| Analizė |
Metodai |
| Pepidinių žemėlių sudarymas |
Proteazo suklaidymas ir skaitmeninė chromatografija-masės spektrometriją (LC-MS) |
Analizinė procedūra
1. Redukcija ir alkiliacija
Tikslas yra sumažinti disulfidinius tiltus ir užblokuoti sugeneruotą laisvą tiolą. Disulfidinių tiltų sumažinimas padeda atverti baltymo struktūrą, kas daro proteolizinę traukimą efektyvesne. Šis etapas taip pat sutrumpins tiltus tarp grandynų atveju daugiau grandynų turinčiems baltymams, kurie turi disulfidinius tiltus, jungiančius grandynus (pvz., monotoniškos antikūno molikulus, mAbs).
2. Baltymo traukimas naudojant enzymus
Tikslas yra išspragauti baltymą į peptidus. Enzymus renkame pagal teorinį baltymo seką ir žinią apie teorinę baltymo traukimą enzymais. Taip renkant enzymus, turėtų būti gauta geriausia peptidų kortelės analizė.
3. Trauktų peptidų analizė Naudojant on-line atvirkštinio fazės aukštos našumo skilties chromatografiją su ultravioletiniu (UV) ir elektrospraižių masės spektrometrišku aptikimu (LC/ES-MS).
Peptidų atskyrimas pagal poliarumą naudojant LC (atvirkštinės fazės LC)
Kai peptidas išsilieja iš LC stulpelio, masės spektrometras sugeneruos masės informaciją kartu su fragmentinių jonų duomenimis, kurie leidžia mums nustatyti sekos informaciją. Mes naudojame sekos informaciją, kad patvirtintume peptido tapatumą ir pateiktume pagrindinę informaciją.
Taip pat galime gauti fragmentavimo informaciją iš peptidų, kai jie įeina į masės spektrometro šaltinį iš LC stulpelio. Atsižvelgiant į tyrimo reikalavimus, tai gali būti arba selektyvus LC-MS/MS, arba neoselektyvus, kuriuo galima laikyti tam tikrą tandeminio MS rūšį.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
