Rekombinantiniai baltymai dažnai mato atvirų aminorūgščių šoninių grandinių, tokių kaip triptofanas (Trp) ir metioninas (Met), oksidaciją, pakeičiant baltymų fizikines ir chemines savybes. Šie pokyčiai savo ruožtu gali prisidėti prie paveiktų baltymų biologinių funkcijų keitimo, pvz., surišimo praradimo, fermentinio aktyvumo sumažėjimo, netikėtai greito klirenso. Baltymai yra svarbūs oksidacinių reakcijų taikiniai, nes jie greitai reaguoja su oksidantais ir jų gausu ląstelėse, tarpląsteliniuose audiniuose ir kūno skysčiuose.
Todėl norint sėkmingai vystytis biofarmacijoje, labai svarbu stebėti baltymų oksidaciją.
Yaohai Bio-Pharma siūlo aminorūgščių oksidacijos analizės paslaugą, kuri leidžia nustatyti aminorūgščių oksidaciją skysčių chromatografijos-masių spektrometrijos (LC-MS) metodu.
Mes dalyvavome įvairių didelių molekulių baltymų struktūriniame apibūdinime, įskaitant rekombinantines subvienetų vakcinas, nanokūnus / VHH / vieno domeno antikūnus (sdAb), antikūnų fragmentus, hormonus / peptidus, citokinus, augimo faktorius (GF), fermentus, ir tt
Amino rūgščių oksidacijos norminiai reikalavimai
Remiantis ICH Q6B gairėmis, oksiduotos formos gali būti aptiktos ir apibūdinamos chromatografiniais, elektroforetiniais ir (arba) kitais atitinkamais analitiniais metodais (pvz., didelio efektyvumo skysčių chromatografija (HPLC), kapiliarine elektroforeze, masės spektroskopija, žiedine dichroizmu).
Analizės metodai
| Analizė |
Metodai |
| Amino rūgščių oksidacija |
LC-MS, atvirkštinės fazės didelio efektyvumo skysčių chromatografija (RP-HPLC) arba hidrofobinės sąveikos chromatografija, didelio efektyvumo skysčių chromatografija (HIC-HPLC) ir masės spektrometrija |
Analitinės procedūros
1. Mėginio paruošimas
2. LC-MS
3. Duomenų analizė
Triptofano (Trp) likučiai yra ypač linkę oksiduotis dėl didelio aromatinio indolo reaktyvumo su reaktyviosiomis deguonies rūšimis. Trp oksidacija reikalauja tam tikro poveikio Trp likučiams, kurie paprastai yra palaidoti trimatėje baltymo struktūroje.
Tačiau kai Trp likučiai oksiduojami, jie gali virsti įvairiais produktais, kurių savybės labai skiriasi nuo pradinio Trp. Dažniausias Trp oksidacijos būdas apima N-formilkinurenino susidarymą (masių skirtumas: +32).
Kita dažniausiai oksiduojama aminorūgštis yra metioninas. Met liekanoje esantis sieros atomas gali priimti arba vieną, arba du deguonies atomus, dėl kurių susidaro atitinkamai sulfoksidas (masių skirtumas: +16) arba sulfonas (masių skirtumas: +32). Ši modifikacija yra gana dažna dėl paprastai didelio Meto paviršiaus poveikio.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
