Glutamino ir asparagino šoninių grandinių deamidavimas yra įprasta modifikacija, kalbant apie poveikį baltymų biofarmacinių preparatų savybėms. Deamidacija gali įvykti glutamino liekanose, bet paprastai daug mažesniu greičiu. Deamidacijos greitį įtakoja temperatūra, pH, vietinė baltymų struktūra ir šalia esančios aminoacilo liekanos.
„Yaohai BioPharma“ siūlo aminorūgščių deamidacijos testavimo paslaugą, kuri leidžia aptikti aminorūgščių deamidaciją naudojant skysčių chromatografijos-masių spektrometriją (LC-MS).
Mes dalyvavome įvairių didelių molekulių baltymų struktūriniame apibūdinime, įskaitant rekombinantines subvienetų vakcinas, nanokūnus / VHH / vieno domeno antikūnus (sdAb), antikūnų fragmentus, hormonus / peptidus, citokinus, augimo faktorius (CF), fermentus, ir tt
Amino rūgščių deamidacijos norminiai reikalavimai
Remiantis ICH Q6B gairėmis, deamiduotos formos gali būti aptiktos ir apibūdintos chromatografiniais, elektroforetiniais ir (arba) kitais atitinkamais analitiniais metodais.
Analizės metodai
| Analizė |
Metodai |
| Deamidacija |
Skysčių chromatografija-masių spektrometrija (LC-MS) |
procedūros
pvz., asparto deamidinimas
1. Fermentinis virškinimas
2. LC-MS, naudojant didelio efektyvumo skysčių chromatografijos (HPLC) sąlygas
3. Duomenų analizė
Asparagino deamidacija vyksta per sukcinimido tarpinį produktą (Suc), kuris yra jautrus racemizacijai ir hidrolizei, todėl susidaro keturi Asp izomerai, įskaitant L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp ir D-IsoAsp.
Teoriškai Gln deamidacija gali generuoti keturis atitinkamus Glu izomerus per procesą, panašų į Asn deamidavimą.
Didelės skiriamosios gebos masės spektrometrija lengvai nustato 1-Da masės skirtumą tarp Asn / Gln turinčių peptidų ir jų atitinkamų deamiduotų atitikmenų Asp / Glu.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
