5'-galo dangtelis yra esminė mRNR modifikacija. mRNR su dangtelio struktūromis, ypač Cap1 struktūromis, palengvina mRNR išvengti įgimto imuninio atsako in vivo, todėl vyksta efektyvus baltymų vertimas.
Fermentinis ribojimas (dviejų etapų metodas) yra įprastas mRNR fiksavimo metodas, panašus į ribojimo procesą eukariotų organizmuose. Veikiant fermentų serijai, 7-metilguaninas (m7G) yra prijungtas prie mRNR 5'-galo per 5'-5' trifosfatinį ryšį ir yra modifikuojamas metilinant, kad susidarytų dangtelio struktūra Cap 1 (m7GpppN).
Natūralios kepurės struktūros formavimosi diagrama
Fermentinio uždarymo reakcijos srautas yra toks:
Linearizuota plazmidinė DNR naudojama kaip šablonas in vitro transkripcijai (IVT) dalyvaujant T7 polimerazei, o mRNR su 5' galo dangtelio struktūra susidaro po vieno etapo gryninimo naudojant vakcinų dangtelio fermentą ir 2'-O. -metiltransferazė.
Paslaugų informacija
Pasirenkama paslauga | Informacija apie paslaugą | Pristatymo laikotarpis (diena) |
mRNR fermentinis ribojimas | Fermentinė uždarymo reakcija | 1 |
Apribojimo reakcijos optimizavimas – neprivaloma | Reakcijos komponentų projektavimas ir optimizavimas | 3 ~ 7 |
Mūsų funkcijos
- Uždengimo reakcijos komponento projektavimas ir optimizavimas
Uždengimo reakcijos komponentas yra optimizuotas, o mRNR transkripto gamyba labai padidėja.
- In vitro ekspresijos patikrinimas
Uždengta mRNR yra transfekuota į 293T ląsteles ir gali būti aptikta tikslinio baltymo ekspresija.
Griežtai kontroliuojant RNaseson eksperimentinę aplinką ir vartojimo reikmenis, veiksmingai užkertamas kelias mRNR skaidymui.
Atvejo analizė
Yaohai Bio-Pharma mRNR platforma sukūrė tobulą ribojimo reakcijos procesą.
Naudojant eGFP mRNR, mRNR pirminį produktą, paruoštą fermentinio dangtelio būdu, 293 valandas transfekavus 24T ląsteles galima stebėti aukštą eGFP fluorescencijos signalą (žalią fluorescenciją), kuris aptinkamas Western Blot (WB) metodu, parodantis, kad Tikslinio baltymo sustiprintas žalias fluorescencinis baltymas (eGFP) gali būti efektyviai ekspresuojamas in vitro.
Fermentinės dangos eGFP mRNR ekspresija 293T ląstelėje
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
