Kalbant apie masinę mRNR gamybą, in vitro transkripcija (IVT) yra efektyvesnis ir brandesnis metodas. IVT reakcija naudoja linijinę plazmidinę DNR, turinčią T7 promotorių kaip šabloną, o mRNR sintetinama su nukleozidų trifosfatais (NTP) kaip substratais, dalyvaujant T7 RNR polimerazei.
Nukleotidų modifikavimas yra proveržis tiriant mRNR, kai nemodifikuotas mRNR molekules atpažįsta tarpląsteliniai RNR jutikliai, kad suaktyvintų įgimtą imunitetą. Atsižvelgiant į mRNR imunogeniškumą in vivo ir transliacijos efektyvumą, IVT procese paprastai naudojami tam tikros rūšies modifikuoti NTP, o įprasti modifikuoti nukleotidai yra pseudouridinas (Ψ), N1-metil-pseudouridinas (N1Ψ) ir 5-metilcitozinas (5 mC).
MRNR in vitro transkripcijos procesas
In vitro transkripcijos (IVT) reakcijos diagrama
Paslaugų informacija
Pasirenkama paslauga |
Informacija apie paslaugą |
Pristatymo laikotarpis (darbo diena) |
In vitro transkripcija (IVT) |
IVT, In vitro transkripcija |
1 |
| Nukleotidų modifikacijos (Ψ/N1Ψ/5mC ir kt.) |
| DNR šablono pašalinimas (DNazė I) |
IVT sąlygų optimizavimas – neprivaloma |
IVT reakcijos komponentų projektavimas ir optimizavimas |
2-5 |
Mūsų funkcijos
- Įvairios nukleotidų modifikavimo strategijos
Pagerinkite mRNR stabilumą ir baltymų ekspresiją in vivo.
- Griežtas testų projektavimas ir optimizavimas
Galima pasiekti iki 10 kb mRNR fragmento paruošimo.
Optimizavus IVT reakcijos sąlygas, transkripcijos greitis yra iki 1:200.
Griežta RNazės kontrolė naudojant eksperimentinę aplinką ir vartojimo reikmenis gali veiksmingai užkirsti kelią mRNR skilimui.
Atvejo analizė
Dabartinė IVT reakcijos sistema yra maždaug optimizuota sintetinėms sistemoms, kurių ilgis yra apie 100 nt, o ne savavališko ilgio mRNR. Kuo ilgesnė mRNR seka, tuo sunkiau ją transkribuoti ir ji labiau linkusi į skaidymą.
Siekdama paruošti pritaikytas apie 10 kb ilgio mRNR sekas, Yaohai Bio-Pharma sėkmingai paruošė aukštos kokybės mėginius su dideliu transkripcijos santykiu 1:135 ir gavo 135 μg iš pradžių išgrynintų mRNR produktų po 1 μg tiesinės plazmidės. buvo transkribuotas in vitro taikant griežtą eksperimentinį projektą, nuolat optimizuojant reakcijos sąlygas ir griežtai kontroliuojant RNazę.
mRNR identifikavimas (agarozės gelio elektroforezė)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
