Inkapsuliavimo pagrindas yra pristatymo sistemos projektavimas ir tobulinimas. Gerai suprojektuota tiekimo sistema leidžia cirRNR molekulėms patekti į organizmą, jos neskaidomos RNR fermentų, o tada efektyviai patenka į tikslinę vietą, prasiskverbia per ląstelės membraną ir išsiskiria į ląstelę.
Lipidų nanodalelės (LNP) yra geriausia prieinama tiekimo sistema, turinti pranašumų dėl kapsuliavimo, ekspresijos in vivo ir saugumo in vivo, palyginti su kitomis tiekimo sistemomis. LNP su nukleorūgščių fragmentais lengvai praryjamos į ląsteles ir sudaro tarpląstelinius kūnus. Patekusi į ląstelę, rūgštinė vidinio kūno aplinka protonuoja ir teigiamai įkrauna jonizuoto lipido galvutę, taip susiliedama su vidine ląstelinio kūno membrana ir išskirdama tikslinę nukleino rūgštį į ląstelę veikti.
Yaohai Bio-Pharma cirRNR paslauga toliau tobulėja ir gali teikti cirRNR-LNP kapsuliavimo paslaugą, kad optimizuotų svarbius svarbius proceso parametrus ir pagerintų cirRNR vaistų gamybos nuoseklumą ir atkuriamumą.
Procesas | Informacija apie paslaugą | Pristatymo laikotarpis (diena) | Pristatomos |
cirRNR-LNP kapsuliavimas | Medžiagų ir skysčių išankstinis apdorojimas | 2 | cirRNR-LNP vaisto produktas (DP) |
Mikrofluidinio prietaiso maišymas | |||
Tangentinis srauto filtravimas | 1 | ||
Sterilizuojantis filtravimas | |||
cirRNR-LNP kokybės kontrolė | Inkapsuliavimo efektyvumas | 1 | Testo ataskaita |
Dalelių dydis ir polidispersiškumo indeksas | |||
Zeta potencialas |
Greita sintezė, didelis MTEP efektyvumas ir iš anksto optimizuoti sprendimai;
Kapsuliavimo santykis gali siekti daugiau nei 90%;
Lipidų nanodalelių dydis gali būti kontroliuojamas keičiant skysčio įpurškimo greitį ir santykį;
cirRNR-LNP produktai yra patvirtinti ląstelių ekspresija in vitro ir gali efektyviai ekspresuoti tikslinį baltymą.
Paruošiami LNP-eGFP cirRNR mėginiai ir skirtingos jų dozės (1 ug, 2 ug ir 4 ug) yra tiesiogiai transfekuojamos į 293T ląsteles, siekiant patikrinti, ar jos gali ekspresuoti tikslinį baltymą. Po 48 valandų transfekcijos galima pastebėti aiškų fluorescencinį signalą ir fluorescencijos intensyvumo dozės didinimo efektą.
Lipo-circ_eGFP, sudarytas iš liposomų ir neįkapsuliuotos eGFP cirRNR, imamas kaip kontrolė.