Remiantis centrine dogma, pasiuntinio RNR (mRNR) yra tiltas, pernešantis genetinę medžiagą iš DNR į baltymus.
mRNR atlieka biologinį vaidmenį, koduodama baltymus in vivo, o subrendusi mRNR eukariotų organizmuose susideda iš penkių komponentų: 5' Cap (dangtelio struktūra), 5' UTR (nekoduojanti sritis), ORF (atviras skaitymo rėmas), 3' UTR. ir 3' poliA uodega (poliadenilato uodega).
Procesas | Pasirenkama paslauga | Informacija apie paslaugą | Pristatymo laikotarpis (diena) |
mRNR sekos projektavimas ir optimizavimas | Kodavimo sekų projektavimas ir optimizavimas |
CDS sekos derinimas CDS kodono optimizavimas |
1 |
Nekoduojančių sekų projektavimas ir optimizavimas |
5' UTR sekos projektavimas ir optimizavimas 3' UTR sekos projektavimas ir optimizavimas polyA sekos projektavimas ir optimizavimas |
1-2 |
5' UTR/3' UTR |
|
3' PolyA Tail |
|
mRNR komponentai | Biologinės funkcijos | Optimizavimo strategijos |
5' Cap | Apsaugokite mRNR nuo degradacijos egzonukleazėmis ir veikite kartu su poliA uodega 3' gale, poliA jungiančiu baltymu ir transliacijos inicijavimo faktoriaus baltymu, kad inicijuotų baltymų transliaciją. | Natūrali Cap1 struktūra išvengia modelio atpažinimo receptorių ir taip sumažina natūralų imuninį atsaką, kuris gali būti pasiektas vieno etapo bendro transkripcijos ribojimu arba dviejų pakopų fermentiniu ribojimu [daugiau žr. mRNR fermentinį ribojimą ir bendro transkripcijos ribą]. |
5' UTR | 5' UTR gali atpažinti ribosomos, reguliuoti mRNR transliaciją ir paveikti mRNR stabilumą. | Sudėtyje yra Kozak sekos be labai stabilios antrinės struktūros. In vitro transkripcijos (IVT) mRNR, pvz., α-globino ir β-globino, pirmenybė teikiama natūraliems labai išreikštų genų UTR. |
CDS | Baltymus koduojančios sritys ir antigenus, antikūnus ar kitus funkcinius baltymus koduojančios sekos. | Kodonų optimizavimas padidina vertimo lygį, atkreipiant dėmesį į tai, kad tam tikri neoptimalūs kodonai gali turėti įtakos baltymų lankstymui. |
3' UTR | Reguliuokite mRNR transliaciją ir stabilumą. | Natūralūs labai išreikštų genų UTR yra pageidaujami IVT mRNR, pvz., α-globinui ir β-globinui. |
3' poliA uodega | Reguliuokite baltymų ekspresiją ir apsaugokite dangtelio struktūrą nuo skilimo. | Reikalingas atitinkamas ilgis (100-150 bp); koduojanti poliA uodegą transkripcijos šablono plazmidėje, užtikrina labiau apibrėžtą poliA uodegos ilgį. |
Keli labai išreikštų natūralių ir modifikuotų UTR bibliotekų šaltiniai; brandi UTR modifikavimo strategija;
Bendradarbiaukite su profesionalia AI algoritmų komanda, kad užbaigtumėte kodonų optimizavimą.
Pridėkite poliA sekas pagal DNR šablonus, kad tiksliau kontroliuotumėte mRNR ilgį.
Pasiekite veiksmingą mRNR ekspresiją su mažu imunogeniškumu.
Dviejų reporterių mRNR sekos dizainas: mCherry-eGFP mRNR
„Yaohai Bio-Pharma“ mRNR paslauga ir toliau atnaujinama kuriant ir optimizuojant dvigubo reporterio geno tandemo seką, kuri užtikrina dvigubų genų koekspresiją.
Naudojant įprastą transfekcijos reagentą, dvigubo geno tandemo seka mCherry-eGFP mRNR yra transfekuojama į 293T ląsteles ir aptinkami du mCherry (raudona) ir sustiprinto žalio fluorescencinio baltymo (eGFP) fluorescenciniai signalai, kartu ekspresuojant po 48 valandų, ir sukrauti. grafikas paryškintas geltonai.
mCherry-eGFP mRNR ekspresija 293T ląstelėje