mRNA in vitro süntees
MRNA peamised komponendid on 5'-cap, 5'-UTR, avatud lugemisraam (ORF), 5'-UTR ja 5' polü-A saba, mis on olulised mRNA funktsiooni säilitamiseks. Teadlased on mRNA järjestuste ja struktuuride tuvastamiseks ja optimeerimiseks kasutanud erinevaid meetodeid.
mRNA süntees viiakse läbi in vitro transkripti (IVT) alusel, kasutades lineaarseid DNA malle, RNA polümeraase (T3, T7 või SP6), modifitseerimata või modifitseeritud nukleotiide, ensüüme ja sobivaid reagente.
5' korgi modifikatsioon
Eukarüotsüütide küpse mRNA järjestused näitavad 7'-otsas 7-metüülguanosiini (m5G) katet, mis parandab mRNA stabiilsust ja translatsiooni efektiivsust. MRNA in vitro püüdmiseks on kaks üldist meetodit. Esiteks saab mRNA-d sulgeda koos in vitro transkriptiga, lisades IVT süsteemi m7GpppG struktuuri cap-analoogi (nt CleanCap). See kaastranskriptsiooniline korkimismeetod tagab loomuliku 5' kapsli struktuuri ja suurendab korkimise efektiivsust peaaegu 90–99% -ni. Teiseks saab mRNA kaardistamist teostada ka in vitro transkriptsioonireaktsioonile järgnevate ensüümreaktsioonide kaardistamise teel.
PolyA modifikatsioon
Polü(A) saba pikendab ka mRNA poolväärtusaega in vivo ja parandab mRNA translatsiooni efektiivsust. Amplifitseeritud polü(A) saba pikkus peaks olema 100-300 nukleotiidi. Lisaks suurendab modifitseeritud adenosiin polü-A saba stabiilsust raku RNaasi lagunemise vastu. Polü-A-saba saab sisestada in vitro transkriptsiooniga, kasutades polü-A-d kodeerivat DNA matriitsi, mille tulemuseks on polü-A spetsiifiline järjestuse pikkus. Rekombinantset polü A polümeraasi saab kasutada ka ensümaatilise polüadenüülimise teel pärast mRNA transkriptsiooni.
Nukleotiidide modifitseerimine
Modifitseeritud nukleosiidid võivad pärssida mustrituvastusretseptorite (PRR) äratundmist ja/või aktiveerimist ning suurendada mRNA vaktsiinide efektiivsust kahel täiesti erineval viisil. Teatud keemiliselt modifitseeritud nukleosiidide, sealhulgas pseudouridiini (ψ), 1-metüülpseudouridiini (m1ψ), tiouridiini (s4U) ja 5-metüültsütosiini (m5C) lisamine võib takistada TLR7/8 ja teiste kaasasündinud immuunretseptorite aktiveerumist, mis vähendab oluliselt immunogeensust. mRNA-st.
mRNA kohaletoimetamise süsteem
MRNA funktsiooni säilitamiseks peab see sisenema peremeestsütoplasmasse ja ekspresseerima spetsiifilisi antigeene. Üks raskemaid väljakutseid mRNA vaktsiinide ja ravimite ees seisneb mRNA viimises sihtrakkudesse piisavalt kõrge translatsioonitasemega, kuna see nõuab väga spetsiifilisi ja tõhusaid mRNA kohaletoimetamissüsteeme. Välja on töötatud ja kasutatud mitmeid mRNA kohaletoimetamise vektoreid, sealhulgas dendriitrakud (DC-d), protamiin, katioonsed polümeerid ja katioonsed liposoomid.
Katioonsete lipiidide kompleksid mRNA ja teiste preparaatidega võivad koos moodustada 80–200 nm suuruseid nanoosakesi, mida nimetatakse lipiidide nanoosakesteks (LNP). Ühe kõige arenenuma mRNA kohaletoimetamise süsteemina sisaldab LNP ioniseeritavaid katioonseid lipiide, looduslikke fosfolipiide, kolesterooli ja polüetüleenglükooli (PEG). Mitmed USA Toidu- ja Ravimiameti poolt heaks kiidetud RNA vaktsiinid ja ravimeetodid (siRNA ja mRNA) põhinevad LNP manustamissüsteemidel.
Yaohai Bio-Pharma pakub RNA jaoks ühtset lahendust
Kohandatud tarned
|
Klass
|
Saavutused
|
spetsifikatsioon
|
Rakendused
|
|
mitte-GMP
|
Ravim, mRNA
|
0.1-10 mg (mRNA)
|
Prekliinilised uuringud, nagu rakkude transfektsioon, analüüsimeetodi väljatöötamine, stabiilsuse-eelsed uuringud, preparaadi väljatöötamine
|
|
Ravimtoode, LNP-mRNA
|
|
GMP, steriilsus
|
Ravim, mRNA
|
10 mg ~ 70 g
|
Uus uuritav ravim (IND), kliinilise uuringu luba (CTA), kliiniliste uuringute pakkumine, bioloogilise litsentsi taotlus (BLA), kaubanduslik tarne
|
|
Ravimtoode, LNP-mRNA
|
5000 viaali või eeltäidetud süstalt/kassetti
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
