mRNA on laialdaselt kasutatud gene- või proteiini funktsioonide uurimises. Samal ajal on see levinud ennetavate ja raviatavate bioloogiliste esitusvormide arendamisel. Kui üks tavalisematest RNA molekülite sünteesistrateegiatest, võimaldab in vitro transkriptsioon (IVT) meil saada kohandatud transkripte efektiivselt.
Yaohai Bio-Pharma on loonud mRNA sünteesitehnoloogia komplekti kvaliteetse RNA andmiseks, nagu järjestuse disain ja optimeerimine, IVT, puhastamine, liivamine ja lipiidnanaopartikli (LNP) paigutamine. Kõik tooted vabastatakse rangete kvaliteedikontrolli (QC) standartide alusel.
Kui 2020. aastal esines COVID-19 pandeemia, on mRNA-tehnoloogia edenemas suurepärases kiiruses ning selle seotud uurimused ja rakendused on saavutanud enneolematu arengu, sealhulgas infektsioonsete haiguste ennetamiseks eelkäijakindlustused, rakkide terapeutilised vaktsiinid ja ravimid, tumorkasutus, proteiini asenduskasutus, regeneratiivmeditsiin ja rakude ja gene ravi (CGT).
mRNA vaktsiin | mRNA Terapeutika |
|
Protsess | Valikuline teenus | Teenuste üksikasjad | Toimetamisaeg (tööpäev) | Toode |
mRNA jada kujundamine ja optimeerimine | Koodivate jadade kujundamine ja optimeerimine | CDS jada kujundamine ja koodonoptimeerimine | 1-3 | Jadajärg fail |
Mittekodeerivate jadade kujundamine ja optimeerimine | UTR, polyA-jadade kujundamine ja optimeerimine | |||
Transkriptsiooniplasmidi ettevalmistamine | Rekombinantplasmidi ettevalmistamine | Geeni süntees | 7-10 | |
Plasmidi amplifitseerimine ja ekstraktseerimine | 4 | |||
Plasmidi lineaarne tegemine ja puhastamine | ||||
mRNA in vitro transkriptsioon | Ko-transkriptsiooniline kappimine (ühe sammu meetod) | In vitro transkriptsioon (IVT) / Kapianaloog | 1-2 | N/A |
Nukleotiidmuudatused (UTP/CTP muudatused) | ||||
DNA malli eemaldamine (DNase I) | ||||
Enzyymiline kappimine (kahe sammu protsess) | IVT | 2-3 | ||
Nukleotiidmuudatused (UTP/CTP muudatused) | ||||
DNA malli eemaldamine (DNase I) | ||||
mRNA töötlemine (liivhloriid/magnetsete palgadega) | ||||
Enzyymiline kappimine | ||||
mRNA puhastamine | Traditsiooniline töötlemisskeem | Liivhloriidipõhine沉淀 | 1 | mRNA ravimained |
Magnetsete pallide purifikatsioon | ||||
Kromaatikasäulpurifikatsiooni skeem | Mitmete kromaatikameetodite kombinatsioon | 1-2 | ||
Puhveri vahetus | Ültrasidusfilterdamine | 1 | ||
mRNA lüöfiliseerimine | Lüöfiliseerimine | Eelsoojendamine | 2-3 | mRNA lüöfiliseeritud pulb |
Esmane kuivatus (sublimatsioon) | ||||
Teisene kuivatus (desorptsioon) | ||||
mRNA enkapsuleerimine | LNP enkapsuleerimine | LNP enkapsuleerimine | 2-3 | mRNA-LNP ravimistoode |
Konsoentratsioon ja puhvervahetus | ||||
mRNA kvaliteedi analüüs | mRNA ravimainedeaine / liivendatud pulber | Konsoentratsioon, puhtus | 1 | Testiaruandlus |
Terviklikkus, kopimehhanismi efektiivsus, polyA saba jaotus | 2-5 | |||
mRNA-LNP ravimistoode | Enkapsuleerimise tõhusus | 1 | ||
Osake suurus ja jaotus | ||||
Pinnaline laeng | ||||
mRNA väljenduse valideerimine | 293T-selekti hindamine | Rakude plaatimine | 4 | |
Rakkude ajutine transfeerimine | ||||
Flooressentsiooni signaali vaatamine | 1-3 | |||
Lääniimmunoblot (WB) / Enzyymi-geeliseositiivne analüüs (ELISA) |
5' Kap |
▪ Kapitaaraolematu ▪ Cap0, ko-capitud ▪ Cap1, ko-capitud ▪ Cap1, enzyymne cappimine |
5’ UTR/3’ UTR |
▪ Looduslik UTR jada ▪ Mutant/Insenerdatud UTR jada |
3' PolyA saba |
▪ 100A ~120A saba (soovitatav) ▪ Segmenteeritud polyA saba ▪ Muud kohandatud sabad |
Muudetud nukleosiidid |
▪ Alamatu baasid ▪ Pseudouriidin (Ψ) ▪ N1-Meetilpseudouriidin (N1Ψ) ▪ 5-meetiltsütoosiin (m5C) ▪ 5-meetiluriidin (m5U) ▪ 5-metoxyuriidin (5moU) ▪ 2-tiouriidin (s2U) ▪ 2′-O-meetil-U ▪ Muud muutused |
Integreeritud teenuste voog
Pakkuda front-end sekvenssi disainist back-end mRNA ettevalmistamiseni, kvaliteedikontrollini ja väljenduse valideerimiseni ulatuva teenuste reost.
Internatsionaalselt tippsekvenssi disain ja optimeerimine
Professionaalne mRNA-sekvenssi disain ja optimeerimine võimaldab tõhusat mRNA väljendust.
Mitmekesed nukleotiidimuudatused
Tõhusalt suurendada mRNA väljendust ja vähendada mRNA negatiivseid immuunivastuseid.
Täiuslik puhastusplaatvorm
Konventsioonilise ja ise disekteeritud puhastusmeetodi kombinatsiooniga saadetakse mRNA näidised kõrge puhasusega.
Täielik kvaliteedikontrolliplaatform
Rikkalik kvaliteedikontrollivalik, mis rahuldab rutinineatestite, nagu kontsentratsioon, A260/280 puhasus ja integriteet, ning kõrge kvaliteedikontrolli nõuded, nagu kaasamine efektiivsus/polyA jaotus.
Kiire kohaletoimetamine
Kohandatud mRNA saab edastada juba 7 päeva jooksul, välisalluvate järjestuste sünteesimisest hoolimata.