Allavoolu protsessi (DSP) arendamise tähtsus
Kogu fermentatsioonipuljong sisaldab sihtvalku või plasmiidi, aga ka toote ja protsessiga seotud lisandeid, nt agregaate, mikroobse raku substraate, peremeesraku valke (HCP), peremeesraku DNA-d (HCD), endotoksiini ja antibiootikume.
Seetõttu on ülioluline välja töötada tõhus DSP, puhastusprotsess, et eemaldada teatud lisandid ning toota kõrgelt puhastatud ja kvaliteetset ravimainet. Lisaks võib puhastusprotsessi optimeerimine aidata suurendada toote taaskasutamist, vähendada kulusid ning parandada protsessi mastaapsust ja reprodutseeritavust.
Märksõnad: protsessi arendamine, optimeerimine ja valideerimine, puhastusprotsess, kromatograafia, lisandite eemaldamine, HCP eemaldamine, HCD eliminatsioon, endotoksiinide eemaldamine, valgu denatureerimine ja voltimine, VLP kokkupanek, konjugatsioon
Kasutusala: biofarmatseutiline tööstus, inimmeditsiin, loomameditsiin, vaktsiin, rekombinantsed suure molekuliga bioloogilised ained, rekombinantsed bioloogilised ained, bioloogiline reaktiiv
Yaohai Bio-Pharma DSP lahendused
Meil on ulatuslik kogemus sihtvalkude või plasmiidide eraldamisel keerukatest maatriksitest, arendades ja optimeerides allavoolu puhastusprotsessi. Bioloogiliste ainete puhastamiseks sobivad erinevat tüüpi ühikoperatsioonid, sealhulgas tsentrifuugimine, filtreerimine, homogeniseerimine, aluseline lüüs, ultrafiltreerimine, sadestamine, valgu denatureerimine ja voltimine, kromatograafia jne.
Meie saadaolevad puhastusarendusteenused hõlmavad järgmist:
- Kogu puhastusprotsessi arendamine alates rakkude või supernatandi kogumisest kuni lõpliku toimeaineni.
- Puhastusprotsessi optimeerimine toote ja protsessiga seotud lisandite põhjal, et tõsta toote kvaliteeti ja ohutust, nt HCP, HCD, endotoksiin.
- Põhiparameetrite määratlemine ja optimeerimine ühes või mitmes üksuses, sealhulgas rakulüüsis, tangentsiaalse voolu filtreerimises, vaigu sõelumises, kromatograafias, valgu denatureerimises ja ümbervoltimises jne.
- Protsessi optimeerimine kvaliteedi, saagise, taaskasutamise, kulude ja mastaapsuse osas.
- Järelvoolu puhastusprotsessi valideerimine.
- Riskipõhine parameetrivahemiku hindamine ja katsete kavandamine (DoE) protsesside modelleerimisel.
Teenuse üksikasjad
Standardiseeritud valgu või plasmiidi puhastamise platvormid põhinevad mitmel töötlemata puhastamisetapil ja vähem kui neljal kromatograafiaetapil, sealhulgas püüdmisel, vahepealsel puhastamisel ja poleerimisel.
| Teenuse üksikasjad |
Üksuse toimingud |
parameetrid |
| Toorpuhastus |
Tsentrifuugimine |
Pöörlemiskiirus, aeg |
| Kõrgsurve homogeniseerimine |
Tahke kogusisaldus, rõhk, tsüklid |
| Pidev leeliseline lüüs |
Resuspendeeritud rakkude ja lüüsilahuse suhe, lüüsiaeg |
| Tangentsiaalse voolu filtreerimine |
Membraani materjal ja pooride suurus, etteande voolukiirus transmembraanne rõhk (TMP), filtrimahu ja membraani pindala suhe |
| Sademed |
Sademe tüüp ja kontsentratsioon, lisand, pH, temperatuur, aeg |
| Denatureerimine ja ümbervoltimine |
Inklusioonkeha valkude solubiliseerimine |
Denatureerivate ainete kontsentratsioon (nt uurea, guanidiini HCl, tugev ioonne detergent), pesuained (nt naatriumdodetsüülsulfaat, SDS), redutseerivad ained (nt ditiotreitool, DTT), kelaativad ained (etüleendiamiintetraäädikhape, EDTA), temperatuur, aeg |
| Valkude ümbervoltimine |
Ümbervoltimise meetodid (lahjendus, dialüüs või SEC-i ümbervoltimine), valgu kontsentratsioonid, puhvrid, pH, temperatuur, aeg, oksüdeerivad ja redutseerivad ained (nt glutatioon, GSH/oksüdeeritud glutatioon, GSSH, DTT/GSSH, tsüsteiin/tsüstiin), väikesed molekulilisandid (L-arginiin, uurea, guanidiin/HCl ja pesuained) |
| Püüdmine, vahepealne puhastamine ja poleerimine |
AC (afiinsuskromatograafia) |
Mitut tüüpi kromatograafiavaiku/kolonni (nt AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), kolonni pikkus ja läbimõõt, puhvri koostis, süstimise maht, liikuva faasi koostis (adsorptsioon ja desorptsioon), pH, voolukiirus, sidumine, Pesemis- ja elueerimistingimused. |
| IEX (anioon- või katioonvahetuskromatograafia) |
| HIC (hüdrofoobse interaktsiooni kromatograafia) |
| Soola eemaldamise ja/või suuruseralduskromatograafia (SEC) |
| RPC (pöördfaasi kromatograafia) |
| MMC, segarežiimi kromatograafia |
Juhtumiuuring
Kohtuasi 1
Meil on ülesandeks arendada ja optimeerida allavoolu puhastusprotsess, et suurendada valgu puhtust 85%-lt 90%-le, vähendades samal ajal kromatograafia etappe.
Yaohai tegi sihtvalgu, bakteriaalse allergia jaoks tugeva ja skaleeritava puhastusprotsessi kolmeastmelise kromatograafiaga. Ja lõplik puhtus saavutas 3%.
Kohtuasi 2
Meie klient määras Yaohai viiruselaadse osakese (VLP) vaktsiini endotoksiinide eemaldamise protsessi optimeerimiseks.
Meie meeskond viis läbi kromatograafia parameetrite optimeerimise ja valmistas ravimaine puhtusega 98% ja endotoksiini jäägiga 12.8 EU/mg.
Meie kogemused
- Oleme osalenud erinevate suurte molekulide, sealhulgas rekombinantsete subühikute vaktsiinide, VLP-de, hormoonide (insuliin, GLP-1, kasvuhormoon), tsütokiinide (Interleukiin-2/IL-2, IL-15, IL-21) väljatöötamises ja valmistamises. ), kasvufaktorid (EGF, FGF, NGF), nanokehad/ühedomeenilised antikehad (sdAb), ensüümid jne.
Tarvikud
Kasutame tööstusharu juhtivaid AKTA Pure, AKTA Avant ja Preparative HPLC süsteeme erinevate kromatograafiameetodite, sealhulgas afiinsus-, ioonivahetus-, hüdrofoobse interaktsiooni, pöördfaasi- ja suuruseralduskromatograafia teostamiseks.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
