Rekombinantsed valgud näevad sageli avatud aminohapete kõrvalahelate, nagu trüptofaan (Trp) ja metioniin (Met), oksüdatsiooni, mis muudab valkude füüsikalis-keemilisi omadusi. Need muutused võivad omakorda kaasa aidata mõjutatud valkude bioloogiliste funktsioonide muutumisele, nagu seondumise kadumine, ensümaatilise aktiivsuse vähenemine, ootamatult kiire kliirens. Valgud on oksüdatiivsete reaktsioonide olulised sihtmärgid, kuna nad reageerivad kiiresti oksüdeerijatega ja neid leidub rohkesti rakkudes, rakuvälistes kudedes ja kehavedelikes.
Seetõttu on valkude oksüdatsiooni jälgimine eduka biofarmatseutilise arengu jaoks ülioluline.
Yaohai Bio-Pharma pakub aminohapete oksüdatsiooni analüüsi teenust, mis võimaldab teil määrata aminohapete oksüdatsiooni vedelikkromatograafia-massispektromeetria (LC-MS) abil.
Oleme osalenud erinevate suurte molekulide, sealhulgas rekombinantsete subühikute vaktsiinide, nanokehade / VHH-de / ühedomeeniliste antikehade (sdAb), antikehade fragmentide, hormoonide / peptiidide, tsütokiinide, kasvufaktorite (GF), ensüümide, valgu struktuuri iseloomustamises. jne.
Aminohapete oksüdatsiooni reguleerivad nõuded
Vastavalt ICH Q6B juhistele saab oksüdeerunud vorme tuvastada ja iseloomustada kromatograafiliste, elektroforeetiliste ja/või muude asjakohaste analüütiliste meetoditega (nt kõrgjõudlusega vedelikkromatograafia (HPLC), kapillaarelektroforees, massispektroskoopia, ringdikroism).
Analüütilised meetodid
| Analüüs |
Meetodid |
| Aminohapete oksüdatsioon |
LC-MS, pöördfaasiline kõrgjõudlusega vedelikkromatograafia (RP-HPLC) või hüdrofoobse interaktsioonikromatograafia kõrgjõudlusega vedelikkromatograafia (HIC-HPLC) ja massispektromeetria |
Analüütilised protseduurid
1. Proovi ettevalmistamine
2. LC-MS
3. Andmete analüüs
Trüptofaani (Trp) jäägid on eriti altid oksüdatsioonile, kuna aromaatsel indoolil on kõrge reaktiivsus reaktiivsete hapnikuliikidega. Trp oksüdatsioon nõuab mõningast kokkupuudet Trp jääkidega, mis tavaliselt on maetud valgu kolmemõõtmelisse struktuuri.
Kuid kui Trp jäägid oksüdeeritakse, võivad need muutuda mitmesugusteks toodeteks, mille omadused erinevad algsest Trp-st. Kõige tavalisem Trp oksüdatsioonitee hõlmab N-formüülkinureniini moodustumist (masside erinevus: +32).
Teine tavaliselt oksüdeeritud aminohape on metioniin. Met-jäägi väävliaatom võib aktsepteerida kas ühte või kahte hapnikuaatomit, mis põhjustavad vastavalt sulfoksiidi (masside erinevus: +16) või sulfooni (masside erinevus: +32) moodustumist. See modifikatsioon on Met-i tüüpiliselt kõrge pinna kokkupuute tõttu suhteliselt tavaline.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
