Kohandatud saRNA süntees
Iseamplifitseeriv mRNA (saRNA), tuntud ka kui replikon-RNA, kodeerib in vitro transkriptsiooni (IVT) mRNA järjestusi ja viiruse replikaasi geene, mis on tuletatud alfa- või flaviviirustest. Viiruse replikaasi geenid võimaldavad mRNA iseamplifitseerimist, mille tulemuseks on suurenenud valgu ekspressioon ja minimaalne nõutav RNA annus võrreldes mitteamplifitseerivate mRNA-dega. Teine aspekt on see, et saRNA on suhteliselt suur molekul (rohkem kui 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma on loonud mRNA sünteesitehnoloogiate komplekti, et pakkuda mitteamplifitseerivat mRNA-d ja iseamplifitseerivat mRNA-d (1000 nt ~ 14000 nt), nagu järjestuste kujundamine ja optimeerimine, IVT, puhastamine, lüofiliseerimine ja lipiidide nanoosakeste (LNP) kapseldamine. . Kõik tooted on välja antud rangete kvaliteedikontrolli standardite alusel.
Joonis 1 IVT mRNA struktuuriomadused: tavapärane, tsirkulaarne ja isevõimenev mRNA.
Iseamplifitseeriva mRNA järjestuse tunnused
Iseamplifitseeriv RNA sisaldab nelja mittestruktuurset valku (tähistatud kui nsP1, nsP2, nsP3 ja nsP4), mis pärinevad alfaviirustest, Venezuela hobuste entsefaliidi viirusest (VEEV). Nende hulgas on nsP1-l kaks ensümaatilist aktiivsust, nimelt GTaasi ja N7MTaasi, samas kui nsP2-l on RTPaasi aktiivsus, mis on keskse tähtsusega IVT mRNA piiramisel Cap 0 struktuuri genereerimiseks. Lisaks toimib nsP2 proteaasi ja helikaasina, hõlbustades kogu nsP kompleksi keerulist töötlemist. NsP3 täpne funktsioon on endiselt raskesti mõistetav, kuid see osaleb interaktsioonides erinevate peremeesraku valkudega, aidates seeläbi kaasa peremeesorganismi viirusevastase vastuse nõrgenemisele.
Alfaviiruse subgenoomse promootori (SGP) piirkond asub enne huvipakkuvat geeni (GOI). SGP element hõlbustab GOI transkriptsiooni algatamist, minnes mööda viiruse nsP valke kodeeriva järjestuse lugemisest.
Joonis 2 Yaohai Bio-Pharma RNASci platvormi eGFP saRNA süntees ja rakuanalüüsid.
SaRNA kohandatud lahendused
SaRNA sünteesiprotokoll on sarnane mRNA-ga: Kohandatud mRNA süntees
- Järjestuse kujundamine
- Plasmiidi malli ettevalmistamine
- in vitro transkriptsioon (IVT)
- mRNA ensümaatiline piiramine
- mRNA kaastranskriptsiooni piiramine
- mRNA puhastamine
- mRNA lüofiliseerimine
- LNP kapseldus
- Analüüs ja testimine
ET
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
