5'-lõpp kappimine on mRNA oluline muundlus. Kapistatud struktuuriga mRNAd, eriti Cap1 struktuuriga, võimaldavad mRNAl vältida sündikaasa immuunsuvi reaksioone elusorganismis, mis viib tõhusale proteiini tõlkimisele.
Enzyymiline kappimine (kaheastmeline meetod) on traditsiooniline mRNA kappimismeetod, mis on sarnane eukariotlike organisatide kappimisprotsessiga. Enzyymide tegevuse all sidutakse 7-metüülguaniiin (m7G) mRNA 5'-lõpuga 5'-5' trifosfaatse liigsega ning see läbib metüülimuundlust, et moodustada kapistruktuur Cap 1 (m7GpppN).
Loodusliku kapistruktuuri moodustamise skeem
Enzyymi kappimisreaktsiooni voog on järgmine:
Lineaarse plasmidi DNA kasutatakse šablonina in vitro transkriptsioonile (IVT) T7 polümeraasi olemasolus, ja pärast ühe sammu purifikatsiooni vaktsiinia kappimise enzyymi ja 2'-O-metüültransferaasi abil moodustub mRNA kahega kapiga struktuuriga.
Teenuste üksikasjad
Valikuline teenus |
Teenuste üksikasjad |
Toimetamisperiood (päev) |
mRNA enzyymiline kappimine |
Enzyymiline kappimisreaktsioon |
1 |
Kappimisreaktsiooni optimeerimine – valikuline |
Reaktsiooni komponendi disain ja optimeerimine |
3~7 |
Meie omadused
- Kappimisreaktsiooni komponendi disain ja optimeerimine
Kappimisreaktsiooni komponent on optimeeritud ning mRNA transkripti tootmine suureneb oluliselt.
- In vitro väljendusverifikatsioon
ÜleminekumRNA transfeeritakse 293T-seletikutesse, ja sihtproteiini väljendust saab tuvastada.
Kaudselt kontrollides eksperimentaalkeskkonna ja kulutamisvahendite RNaseid, vältitakse mRNA degradatsiooni efektiivselt.
Praktikunne
Yaohai Bio-Pharma mRNA platvorm on loonud täiusliku üleminekureaktsiooni protsessi.
Enzymaatsest eGFP mRNA kohta, mis ettevalmistati enzymaalsete üleminekute abil, võib eGFP fluoresentsia signaali (roheline fluoresents) kõrge tasemel tuvastada 24 tunni pärast 293T-seletikute transfeerimist, mida tuvastatakse läbi Western Blot (WB), näitades, et sihtproteiin tugevdatud rohelise fluoresentsproteiini (eGFP) võib efektiivselt väljenduda in vitro.
Enzymaalsete üleminekutega eGFP mRNA väljendamine 293T-seletikutes
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
