In vitro transkriptsiooni (IVT) mRNA valmistamisprotsessis on T7 RNA polümeraasi abil IVT transkriptsioonimatriitsiks vajalik lineariseeritud plasmiidne DNA. Kvaliteetne plasmiidne DNA on in vitro transkriptsiooni jaoks ülioluline.
Tuginedes küpsele plasmiidide ettevalmistamise teenuseplatvormile, võib Yaohai Bio-Pharma pakkuda kõrge puhtusastmega ja kõrgetasemelist lineariseeritud plasmiidse DNA ettevalmistamise teenust, et saavutada tõhus IVT transkriptsioon.
Teenuste üksikasjad
| Protsess | Valikuline teenus | Teenuse üksikasjad | Tarneaeg (tööpäev) |
| Tsirkulaarse plasmiidi valmistamine | Geenide süntees | Geenide süntees (kolmanda osapoole) | 7-10 |
| Plasmiidi võimendamine | Plasmiidi võimendamine | 2 |
| Plasmiidi ekstraheerimine |
| Lineariseeritud plasmiidi valmistamine | Plasmiidi lineariseerimine ja puhastamine | Plasmiidi lineariseerimine | 1 |
| Lineariseerimine DNA puhastamine |
| Plasmiidse DNA kvaliteedi kontroll | Kontsentratsiooni puhtus | Ultraviolett (UV) spektrofotomeetria | 1-2 |
| Plasmiidi konformatsioon | Agaroosgeelelektroforees (AGE) |
| Kapillaarelektroforees (CE) - valikuline |
| Plasmiid tuvastada | Restriktsiooniensüümi identifitseerimine/ AGE |
Meie funktsioonid
- Freecut Template Plasmiid
Lineariseerimismeetodite paindlik valik
DNA ekstraheerimis- ja puhastamismeetodite optimeerimine kõrge taaskasutamise määra saavutamiseks.
Ranged protsessikontrolli standardid, plasmiidiproovide superhelikaalne konformatsioonimäär uuringu jaoks on üle 80%.
Kõrgetasemelised ja tõhusad plasmiidide ettevalmistamise ja kvaliteedikontrolli teenused, mis vastavad eksperimentaalsetele vajadustele.
Juhtumiuuring
Võttes näiteks Yaohai Bio-Pharma kataloogi mRNA_lutsiferaasi toote, on transkriptsioonimatriitsi plasmiidiproovi (uuringukvaliteediga) superhelikaalne suhe üle 90%, linearisatsioonisuhe on 100% lähedal ja sellele järgnev transkriptsioonisuhe kuni 1:200 ( lineariseeritud plasmiidne DNA:mRNA).
Matriitsina lineariseeritud plasmiidi valmistamisel saadud mRNA_lutsiferaas transfekteeritakse 293T rakkudesse ja ensüümi-substraadi reaktsiooni aktiivsust hinnatakse 24 tundi pärast transfektsiooni.
On võimalik tuvastada ilmselge tugev lutsiferaasi aktiivsuse signaal, st lutsiferaasi valk ekspresseerub tõhusalt, mis viitab sellele, et transkriptsioonimatriitsi puhtus võib täielikult rahuldada kvaliteetse mRNA valmistamise nõude.
Superspireeritud plasmiidi suhte analüüs
Lutsiferaasi mRNA ekspressiooni valideerimine in vitro
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
