In vitro transkriptsiooni (IVT) mRNA ettevalmistamisprotsessis on vajalik lineaarne plasmid DNA, mis kasutatakse IVT transkriptsioonimallina T7 RNA polümeerases abil. Kvaliteetne plasmid DNA on oluline in vitro transkriptsioonile.
Ärge kaotage kogemusega plasmidite ettevalmistamise teenuse platvormil põhines, võib Yaohai Bio-Pharma pakkuda lineaarse plasmid DNA ettevalmistamise teenust kõrge puhtuse ja standardiga, et saavutada tõhus IVT transkriptsioon.
Protsess | Valikuline teenus | Teenuste üksikasjad | Toimetamisaeg (tööpäev) |
Ringplasimidito ettevalmistamine | Geeni süntees | Geeni süntees (kolmandate poolte poolt) | 7-10 |
Plasmidi amplifitseerimine | Plasmidi amplifitseerimine | 2 | |
Plasmidi ekstraktioon | |||
Lineaarse plasmidi ettevalmistamine | Plasmidi lineaarne tegemine ja puhastamine | Plasmidi lineaarneks tegemine | 1 |
DNA lineaarsete osade puhastamine | |||
Plasmidilise DNA kvaliteedikontroll | Konsoentratsiooni puhtus | Ultraviolet (UV) spektroofotomeetria | 1-2 |
Plasmidikonformatsioon | Agaarosegelei elektroforees (AGE) | ||
Kapillaareelektrofoorees (CE)-valikuline | |||
Plasmidi identifitseerimine | Piiranguenzümi identifitseerimine / AGE |
Linariseerimismeetodite paindlik valik
DNA ekstraktimise ja puhastamismeetodite optimeerimine, et saavutada kõrge taastamisnäitaja.
Tuginedes rangemate protsessi juhtimisnormidele, on plasmidmustrite superheliksonliku konformatsiooni määr uuringuteks üle 80%.
Kõrge standard ja tõhus plasmidi ettevalmistamine ning kvaliteedikontrolliteenused, mis rahuldavad eksperimentaalseid vajadusi.
Võttes Yaohai Bio-Pharma kataloogi mRNA_luciferase toote näiteks, on transkriptsiooniplatvormina kasutatava plasmidmustri (uuringutaseme) superheliksonlik suhe üle 90%, lineariseerimissuhe läheneb 100%-le ja järgnev transkriptsioonisuhe jõudab kuni 1:200 (lineariseeritud plasmid DNA:mRNA).
Lineariseeritud plasmidi platvormina valmistatud mRNA_luciferase transfeeritakse 293T-seletesse, ning enzyymi-substraati reaktsioonilisus hindatakse transfeerimise järel 24 tunnis.
Ilmne tugev luciferaasi aktiivsuse signaal tuvastatakse, mis tähendab, et luciferaasiproteiin ekspresseeritakse tõhusalt, mida näitab sellest, et transkriptsiooni malli puhtus vastab kvaliteetse mRNA valmistamise nõuetele täielikult.
Superkesaline plasmid suheass
Luciferaasi mRNA ekspressiooni valideerimine in vitro