In vitro tsükliteerimise ja RNase R-enričeerimise abil saadud tooted nõuavad lisaks in vitro transkriptsioonilt (IVT) ka eemaldamist, sealhulgas tsükliteerimisreaktsioonis kasutamata aluseid, reaktsiooni kõrvaltooteid ja katki läinud RNA-d.
Yaohai Bio-Pharmal on kättesaadavad tugevad LiCl-sedimentatsioon, magneetne parem purifikatsioon, isearendatud purifikatsioon ning muud mitmekesed purifikatsiooniväljared, mis võimaldavad erinevaid kontaminate efektiivselt eemaldada ja ette valmistada väga puhas circRNA.
Purifikatsioonimeetod väikese kogusega circRNA jaoks rakutransfektsiooniks ja osana loomakatsedustest.
Puhastuslahend väikese mahu circRNA jaoks rakude transfeerimiseks ning osanaloomulikutes eksperimentides.
Kasutussildad kõrgema kvaliteediga;
Stabiilne ja skaleeritav puhastusprotsess, et rahuldada GMP tootmise nõudeid.
Protsess | Valikuline teenus | Teenuste üksikasjad | Toimetamisperiood (päev) | Toodetavad tulemused |
circRNApuhastus | Tavapärane puhastuslahendus | Liivhloriidipõhine沉淀 | 1 | circRNA ravimainimine |
Magnetsete pallide purifikatsioon | ||||
Ülemalt puhta circRNA puhastus | Ettevalmistuslik kõrge jõulisik väisakromaatiline (HPLC) | 1-2 | ||
Puhveri vahetus | Ültrasidusfilterdamine | 1 | ||
circRNA kvaliteedikontroll | Konsoord / tühjenda | Ultraviolet (UV) spektroofotomeetria | 0.5 | Testiaruandlus |
Puhtus | Agarosegelei elektrofoorees (AGE)/E-Gel | |||
HPLC-valikuline | 1 |
Rakendusskenaariumid on saavutatavad.
circRNA puhasusega üle 90%;
Kaudselt kontrollides eksperimentaalkeskkonna ja tarbimisvarustuse RNaseid, takistatakse RNA degradatsiooni tõhusalt.
Yaohai Bio-Pharma on loonud tõelise circRNA puhasustamise lahenduse, mis eemaldab tõhusalt erinevaid protsessi-seoseid impuursid.
Traditsioonilise lahenduse abil puhasustatud ring-RNA tooted segnevad endiselt ilmselt katkiste RNA ja intronidega.
Yaohai Bio-Pharma arendatud puhastussüsteemi abil saab edukalt eemaldada erinevad lineaarsed RNA puhtusteadmised, nagu katkendunud RNA ja intronid.
circRNA väljenduse kontroll
Tavapärases liposoomi abil transfeeritakse puhatud eGFP circRNA 293T-sele, ning 24 h jooksul vaadeldakse fluoresentsset signaali, mis tugevneb ka 48 h jooksul. Fluorescentsne signaal tuvastatakse endiselt ka transfektsiooni 7. ja 14. päeval.