Seoses mRNA masstootmisega on in vitro transkriptsioon (IVT) tõhusam ja küpsem meetod. IVT reaktsioon võtab matriitsina kasutusele lineariseeritud plasmiidse DNA, mis sisaldab T7 promootorit, ja mRNA sünteesitakse substraatidena nukleosiidtrifosfaatidega (NTP) T7 RNA polümeraasi juuresolekul.
Nukleotiidide modifitseerimine on läbimurre mRNA uurimisel, kus intratsellulaarsed RNA andurid tunnevad ära modifitseerimata mRNA molekulid, et aktiveerida kaasasündinud immuunsus. MRNA in vivo immunogeensuse ja translatsiooni efektiivsuse kaalutlustel kasutatakse IVT protsessis tavaliselt teatud tüüpi modifitseeritud NTP-sid ja tavalised modifitseeritud nukleotiidid on pseudouridiin (Ψ), N1-metüül-pseudouridiin (N1Ψ) ja 5-metüültsütosiin (5 mC).
mRNA in vitro transkriptsiooniprotsess
In vitro transkriptsiooni (IVT) reaktsiooni diagramm
Teenuste üksikasjad
Valikuline teenus |
Teenuse üksikasjad |
Tarneaeg (tööpäev) |
In vitro transkriptsioon (IVT) |
IVT, In vitro transkriptsioon |
1 |
| Nukleotiidide modifikatsioonid (Ψ/N1Ψ/5mC jne) |
| DNA matriitsi eemaldamine (DNaas I) |
IVT tingimuste optimeerimine – valikuline |
IVT reaktsioonikomponentide projekteerimine ja optimeerimine |
2-5 |
Meie funktsioonid
- Mitmekesised nukleotiidide muutmise strateegiad
Parandage mRNA stabiilsust ja valgu ekspressiooni in vivo.
- Range testi kavandamine ja optimeerimine
MRNA fragmendi valmistamine on võimalik kuni 10 kb.
IVT reaktsioonitingimusi optimeerides on transkriptsioonikiirus kuni 1:200.
RNaasi range kontroll katsekeskkonna ja tarbekaupade kaudu võib tõhusalt ära hoida mRNA lagunemist.
Juhtumiuuring
Praegune IVT reaktsioonisüsteem on ligikaudu optimeeritud sünteetiliste süsteemide jaoks, mille pikkus on umbes 100 nt, mitte suvalise pikkusega mRNA-de jaoks. Mida pikem on mRNA järjestus, seda raskem on seda transkribeerida ja seda suurem on selle lagunemine.
Umbes 10 kb pikkuste kohandatud mRNA järjestuste valmistamiseks on Yaohai Bio-Pharma edukalt valmistanud kvaliteetseid proove kõrge transkriptsioonisuhtega 1:135 ja saanud pärast 135 μg lineariseeritud plasmiidi 1 μg algselt puhastatud mRNA saadusi. transkribeeriti in vitro range eksperimentaalse disaini, reaktsioonitingimuste pideva optimeerimise ja RNaasi range kontrolli kaudu.
mRNA tuvastamine (agaroosigeeli elektroforees)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
