MRNA massetoote puhul on in vitro transkriptsioon (IVT) tõhusam ja kaugemarelvatud meetod. IVT-reaktsioonis kasutatakse lineaarset plasmidi DNA, mis sisaldab T7 promotorit mallina, ning mRNA süntetiseeritakse nukleosiiditritofaatide (NTP-de) alusel T7 RNA polümeerases olemasolus.
Nukleotiidi muutmine on läbimurde mRNA uurimises, kus muutmata mRNA molekulid tuvastatakse hüüdnese RNA-sensorite poolt, et aktiveerida sissepõlne immuniteet. Arvestades mRNA elus immunogeeniust ja tõlkimise efektiivsust kasutab IVT protsess tavaliselt mõnda liiki muudetud NTP-de ning levinud muudetud nukleootiidid on psiudosüüsiin (Ψ), N1-metyl-psiudosüüsiin (N1Ψ) ja 5-metüültsütoosiin (5mC).
MRNA in vitro transkriptsiooniprotsess
In vitro transkriptsiooni (IVT) reaktsiooni skeem
Teenuste üksikasjad
Valikuline teenus |
Teenuste üksikasjad |
Toimetamisaeg (tööpäev) |
In vitro transkriptsioon (IVT) |
IVT, In vitro transkriptsioon |
1 |
| Nukleotiidi muutmine (Ψ/N1Ψ/5mC jne.) |
| DNA malli eemaldamine (DNase I) |
IVT tingimuste optimeerimine - valikuline |
IVT reaktsiooni komponendite disain ja optimeerimine |
2-5 |
Meie omadused
- Mitmekesed nukleotiidimuutuste strateegiad
Parandage mRNA stabiilsust ja proteiini ekspressiooni vivo tingimustes.
- Range testi disain ja optimeerimine
mRNA fragmentide ettevalmistamine kuni 10kb on saavutatav.
Optimeerides IVT reaktsiooni tingimusi, on transkriptsiooni kiirus kuni 1:200.
Rangeeritud kontroll RNase üle eksperimentaalse keskkonna ja tarbimisvahendite võib tõhusalt ennetada mRNA degradatsiooni.
Praktikunne
Praegune IVT reaktsioonisüsteem on umbes optimeeritud sünteesisüsteemide jaoks, mille pikkus on umbes 100 nt, mitte aga suvalise pikkusega mRNAdena. Mida pikem on mRNA jada, seda raskem see transkribeerida ja seda tõenäolisem on see degradatsioonile.
Et ette valmistada kohandatud mRNA jadu, mille pikkus on umbes 10 kb, on Yaohai Bio-Pharma edukalt valmistanud kvaliteetseid probe, kus transkriptsioonisuhe oli 1:135 ning saadi 135 μg algselt tühjastatud mRNA tooteid pärast 1 μg lineariseeritud plasmidi in vitro transkriptsiooni rangka eksperimentaalse plaani, pideva reaktsioonitingimuste optimeerimise ja range RNase kontrolli abil.
mRNA identifitseerimine (agaroomne geleelektrofoor)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
