N-glykosülaatsiooni asukoha okupatsioon on glykopeptide füsioloogiline omadus ja peamiselt toodab N-glykaani. Yaohai Bio-Pharma N-glykosülaatsiooni asukoha okupatsiooni analüüsitud teenus tehakse läbiviimise, vabastamise, rikastamise ja analüüsi abil Liquid Chromatography-Electrospray Ionization Mass Spectrometry-Mass Spectrometry (LC-ESI-MS/MS).
Oleme osalenud erinevates suurte molekulite proteiinistruktuuri karakteriseerimises, sealhulgas rekombinantsetes subüünivaktsiinides, nanokehades/VHHs/d ühe domeeni kehadest (sdAbs), antikehaosades, hormoonides/vedelikutest, sütokiinides, kasvuasjades (GF), enzyymides, kollageenides jne.
Reguleerivad nõuded N-glykosülaatsiooni asukoha okupatsioonile
Kohas ICH Q6B juhendiga, „glykopeptide puhul määratakse hapnikute sisaldus (neutraalsed hapnikud, aminohapnikud ja sialihapped). Lisaks analüüsitakse hapnikukettide struktuuri, oligohaapsiidi mustri (antennaprofiili) ning polüpeptiidikettsi glykosüleerimispaigi võimalikult täielikult.”
Analüütiline meetod
| Analüüs |
Meetodid |
| N-glykosüülatsiooni kohtade hõivatus |
LC-MS deglekosülaasi ja proteaasi tuumistamise järel |
Menetlused
1. Valgude tuumistamine väikeste peptiidimurdete genereerimiseks.
2. N-glykaani vabastamine endoglykosüdaasi H või PNGase F abil. Endoglykosüdaasi H lõhub seose kahe keskkonnas asuva GlcNAc-resiidu vahel N-linkitud glykaanides, samal ajal kui PNGase F on glykoamiid, mis lõhub GlcNAc ja Asn vahelise seose, vabastades terve hapnikuketta ja teisendades Asn Asp-ks, millega suureneb mass 1-Da võrra.
3. N-glykopeptide rikkumine HILIC (hydrofiilsete interaktsioonide vedelkromatograafia) abil
4. N-linkitud glykosüleerimispaigade okupatsiooni analüüs LC-ESI-MS/MS abil.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
