N-glükosüülimiskoha hõivatus on glükoproteiinide füsioloogiline tunnus ja toodab peamiselt N-glükaani. Yaohai Bio-Pharma N-glükosüülimiskoha hõivatuse analüüsi teenust teostatakse seedimise, vabastamise, rikastamise ja analüüsi abil, kasutades vedelikkromatograafia-elektropihustus-ionisatsiooni massispektromeetriat-massispektromeetriat (LC-ESI-MS/MS).
Oleme osalenud erinevate suurte molekulide, sealhulgas rekombinantsete subühikute vaktsiinide, nanokehade/VHH-de/ ühedomeeniliste antikehade (sdAb), antikehade fragmentide, hormoonide/peptiidide, tsütokiinide, kasvufaktorite (GF), ensüümide, valgu struktuuri iseloomustamises. jne.
Regulatiivsed nõuded N-glükosüülimiskoha hõivatuse kohta
Vastavalt ICH Q6B juhistele "määratakse glükoproteiinide puhul süsivesikute sisaldus (neutraalsed suhkrud, aminosuhkrud ja siaalhapped). Lisaks analüüsitakse parimal võimalikul määral süsivesikute ahelate struktuuri, oligosahhariidide mustrit (antenniprofiili) ja polüpeptiidahela glükosüülimiskohta.
Analüütiline meetod
| Analüüs |
Meetodid |
| N-glükosüülimiskoha hõivatus |
LC-MS pärast deglükosülaasi ja proteaasi seedimist |
Protseduurid
1. Valkude lõhustamine väikeste peptiidide fragmentide saamiseks.
2. N-glükaani vabastamine endoglükosidaas H või PNGaas F abil. Endoglükosidaas H lõhustab sideme kahe GlcNAc jäägi vahel N-seotud glükaanide tuumas, samas kui PNGaas F on glükoamidaas, mis katkestab sideme GlcNAc ja Asn vahel, vabastades kogu suhkruahel ja Asn muutmine Asp-ks massi suurenemisega 1-Da.
3. N-glükopeptiidi rikastamine HILIC-i (hüdrofiilse interaktsiooni vedelikkromatograafia) abil
4. N-seotud glükosüülimiskoha hõivatuse analüüs, kasutades LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
