Vedelikkromatograafia-massspektromeetria (LC-MS) põhinevad peptiidide kaardistamise andmed annavad suurel hulgal teavet natiivsete ja rekombinantsete valkude primaarse ja kõrgema järgu struktuuri kohta, sealhulgas aminohappejärjestuse katvuse, translatsioonijärgsete modifikatsioonide (PTM-id, nt glükosüülimine) kohta. , oksüdatsioon, deamideerimine), disulfiidsidemed jne.
Yaohai Bio-Pharma pakub teie sihtvalgu jaoks peptiidide kaardistamise analüüsiteenuseid LC-MS abil, et kiirendada teie valgu struktuuri uurimist.
Oleme osalenud erinevate suurte molekulide, sealhulgas rekombinantsete subühikute vaktsiinide, nanokehade/VHH-de/ ühedomeeniliste antikehade (sdAb), antikehade fragmentide, hormoonide/peptiidide, tsütokiinide, kasvufaktorite (GF), ensüümide, valgu struktuuri iseloomustamises. jne.
Peptiidide kaardistamise regulatiivsed nõuded
ICHQ6B juhises soovitatakse: „Toote selektiivne fragmenteerimine diskreetseteks peptiidideks viiakse läbi sobivate ensüümide või kemikaalide abil ning saadud peptiidifragmente analüüsitakse HPLC või muu sobiva analüütilise protseduuriga. Peptiidifragmendid tuleks võimalikult palju identifitseerida, kasutades selliseid meetodeid nagu aminohappe koostise analüüs, N-terminaalne järjestus või massispektromeetria (MS). Toimeaine või ravimtoote (DP) peptiidi kaardistamine, kasutades sobivalt valideeritud meetodit, on meetod, mida sageli kasutatakse partii vabastamiseks soovitud toote struktuuri kinnitamiseks.
Analüütilised meetodid
| Analüüs |
Meetodid |
| Peptiidide kaardistamine |
Proteaasi seedimine ja vedelikkromatograafia-massispektromeetria (LC-MS) |
Analüütiline protseduur
1. Redutseerimine ja alküülimine
Eesmärk on vähendada disulfiidsildu ja blokeerida tekkinud vaba tiool. Disulfiidsildade vähendamine aitab avada valgu struktuuri, mis muudab proteolüütilise seedimise tõhusamaks. See samm purustab ka ahelatevahelised sillad mitme ahelaga valkude puhul, millel on ahelaid ühendavad disulfiidsillad (nt monoklonaalsed antikehad, mAb-d).
2. Valgu seedimine ensüümide abil
Eesmärk on lagundada valk peptiidideks. Ensüümide valikul lähtusime valgu teoreetilisest järjestusest ja teadmistest valgu teoreetilisest seedimisest ensüümidega. Sel viisil ensüüme valides peaks tulemuseks olema parim peptiidide kaardistamise analüüs.
3. Seeditud peptiidide analüüs On-line pöördfaasi kõrgjõudlusega vedelikkromatograafia kasutamine ultraviolettkiirguse (UV) ja elektropihustus-massspektromeetrilise tuvastamise (LC/ES-MS) abil.
Peptiidide eraldamine polaarsuse alusel, kasutades LC (pöördfaasiline LC)
Kui peptiid elueerub LC kolonnist, genereerib massispektromeeter massiteavet koos fragmendi ioonide teabega, mis võimaldab meil määrata järjestusteavet. Kasutame järjestusteavet peptiidi identiteedi kinnitamiseks ja esmase teabe edastamiseks.
Samuti saame genereerida killustumise teavet peptiididest, kui nad sisenevad LC-kolonnist massispektromeetri allikasse. Olenevalt uuringu nõuetest on see kas selektiivne LC-MS/MS või mitteselektiivne, mida võib pidada tandem-MS vormiks.
ET
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
