Vedeliku kromaatograafia-massi-spektromeetria (LC-MS) põhine vedelikute karteerimise andmed pakuvad suurt hulka teavet aluse ja kõrgema järku struktuuride kohta natuke ja rekombinantsete proteiinidesse, sealhulgas aminohapenikorragaate katvuse, pärasttlendusmuudatused (PTMs, näiteks šüganesamine, oksidatsioon, deamidatsioon), disülfiidside sidemed jne.
Yaohai Bio-Pharma pakub vedelikute karteerimise analüüsitingimusi teie sihtmolekulile LC-MS abil, et kiirendada teie uurimist proteiinistruktuuri kohta.
Oleme osalenud erinevates suurte molekulite proteiinistruktuuri karakteriseerimises, sealhulgas rekombinantsetes subüünivaktsiinides, nanokehades/VHHs/d ühe domeeni kehadest (sdAbs), antikehaosades, hormoonides/vedelikutest, sütokiinides, kasvuasjades (GF), enzyymides, kollageenides jne.
Reguleerivate nõuete täitmine vedelikute karteerimisel
ICHQ6B juhend soovitab: „Toote valikuline fragmenteerimine diskreetseteks peptiidideks tehakse sobivate enzyymi või keemiliste ainetega, ning saadud peptiidifragmente analüüsitakse HPLC-ga või teiste sobivate analüüsimenetlustega. Peptiidifragmente tuleb identifitseerida võimalikult täielikult kasutades tehnikaid nagu amünaatihaldoseisu analüüs, N-poliendi sekveneerimine või massispektriomeetria (MS). Aktiivseteainese või ravimistoote (DP) peptiidikaart on meetod, mis kinnitab sageli soovitud toote struktuuri partii väljastamiseks, kasutades sobivalt valideeritud meetodit.”
Analüütilised meetodid
| Analüüs |
Meetodid |
| Peptiidikaart |
Proteaasi digeerimine ja vedelkromaatograafia-massispektriomeetria (LC-MS) |
Analüütiline protseduur
1. Reduktsioon ja alküleerimine
Eesmärk on vähendada dissülfiidisisseid ja blokeerida tekkinud vaba tioli. Dissülfiidisisse vähendamine aitab avada proteiini struktuuri, mis muudab proteolüütse hajutamise efektiivsemaks. See samm lõhub ka sidemed ahelate vahel dissülfiidisissega linkitud mitu ahela omavad proteiinid puhul (nt monokloonilised antikehad, mAbs).
2. Proteiini hüütmine enzyymi abil
Eesmärk on tuhmestada proteiinipeptideks. Enzyümide valimine toetatakse proteiini teoreetilisel jadas ning teadmistel enzyümidest, mis teoreetiliselt hävivad proteiini. Selline valik peaks andma parima peptiidikaardi analüüsi.
3. Hajutatud peptiidide analüüs Kasutades võrgufaasi kõrge jõulisega vedel kromaatograafiat ümbrikvalguse (UV) ja elektrospraiidi mass-spektromeetri tuvastusega (LC/ES-MS).
Peptiidide eraldamine poolus alusel LC-ga (võrgufaasi-LC)
Kui peptiid elueerib LC veerust, toodab mass-spektrometer koos fragmentiioni infoga massi informatsiooni, mis võimaldab meil kindlaks teha järjestuse informatsiooni. Me kasutame järjestuse infot, et kinnitada peptiidi identsust ja pakkuda esialgset infot.
Me saame ka genereerida fragmenteeringu infot peptiididest, kui need sõltuvad mass-spektrometri allikast LC veerust. Uurimise nõuetel sõltuvalt on see kas valikuline LC-MS/MS või mittevalikuline, mida saab pidada mingi vormi tandem-MS-na.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
