Цыркавыя RNA (circRNA) спачатку былі адкрыты як някодуючыя RNA ў 1979 годзе; не раней 2015 года транскрыбованыя circRNA былі знайдзены ў Drosophila, што прывяло да даследвання in vitro circRNA для лячбы і прадупажэння.
circRNA самараспрацоўваюцца і па тым не маюць звычайнай структуры, такой як 5' капа ці 3' polyA хвост. Гэтая структура робіць іх больш стаямымі і абароннымі ад экзонуклеаз, таких як RNase R.
Структурныя элеманты цыркавай RNA (circRNA)
DNA-шаблон для сінтэза circRNA звычайна ўключае унутраны сайт ўваходу рибасомы (IRES), адкрытую чыталную рамку (ORF) і іншыя кампаненты, якія крытычна важныя для in vitro цыркуляцыі. Напрыклад, мы выкарыстаўшы плазмід як шаблон для транскрыпцыі in vitro (IVT), які складаецца з гамалогічных рукаваў, 3’ інтрона, 3’ экzoна, IRES, ORF, 5’ экzoна і 5’ інтрона, каб падготавіць circRNA метадам самасплайсінга.
Внутрішні рэгіён пачатку трансляцыі (IRES) выконвае важныя ролі ў трансляцыі цыркавых РНК. IRES энцефаламіакардітнага віруса (EMCV), IRES коксакевірусу B3 (CVB3), IRES чалавечага риновіруса B3 (HRV-B3) і іншыя IRES часта выкарыстоўваюцца для трансляцыі вітрэннай сінтэзірованай цыркавай РНК.
Цыклізацыя лінейных прэкурсораў цыркавых РНК у жывой сістэме з'яўляецца важным этапам сінтэзасці цыркавых РНК, звычайна праз хімічныя, анзыматычныя і рибасамаль-медыйтыраваныя самапаўноўленчыя шляхі. Вядомая як кампанент галоўнай мэтады ў галіне, хімічная метада вытворэння цыркавых РНК, якая паўстаў у 1988 годзе, бяспрынцыйпа не выкарыстоўваецца сёння з-за высоцеяй кастанка, нізкай выдачы, вялікай колькасці побачных продуктаў і таго факту, што яна даступная толькі для цыклізацыі РНК даўжынёй да 70 нуклеатыд.
Энзыматычныя метады цыклізацыі RNA заснаваны на энзымах бактерыяфага T4 ці рыбазах, такіх як T4 DNA лігаза (T4 Dnl 1), T4 RNA лігаза 1 (T4 Rnl 1) і T4 RNA лігаза 2 (T4 Rnl 2). Для фармавання кольцаўага RNA ў выніку дзеяння энзымоў бактерыяфага T4, нуклеазідныя монофосфаты павінны быць розмешчаны на 5' канцы і спалучаны з групою OH на 3' канцы RNA. У міру як нуклеазідныя трифосфаты дабавляюцца падчас рацэнцыі, IVT RNA ўтрымлівае гуаназідны трифосфат (GTP) на 5’ канцы.
Рыбазы — гэта RNA-последавательнасці, якія супрацоўвайшчаюць самазлучэнне, пераўтвараючы лінейныя RNA-молекулы ў цырклявыя RNA без неабходнасці ў дадатковых энзымakh. Працэс самазборкі ўключае два парадыкальных трансэстыравальных рацэнцыі ў спецыфічных месцах, каб забезпечыць утварэнне жаданых продуктаў cirRNA. Метад самазлучэння група I інтранаў, які таксама вядомы як PIE (енкапсуляцыя інтранаў і экзоноў), які дазваляе вырабляць cirRNA даўжыней больш за 5 kb, былі шырока аналізаваныя і даказалі сваю карыснасць.
Зastosванне кіруючага RNA (circRNA)
Вакцыны на базе circRNA
Падобна на лінейныя mRNA, circRNA можуць пераварыцца ў якія-небудзь белкі ў цэлевых клетках і спрычыніць магутную гумаральную і клетковую імунанасць. Недавна некалькі даследавальных каманд паспяхова развілі вакцыны на базе circRNA для захопу ад COVID-19. Іх вынікі не толькі маюць перавагі лінейных вакцын mRNA, але і выказалі лепшую стаякасць і даўжэйшую трываласць экспрэсіі белка па спалучэнні з лінейным mRNA. Таму вакцыны на базе circRNA можуць спрычыніць дастатковыя імунныя адказы нават у малых дазах.
Крыйніцай, некаторыя даследчыкі супраўдзілі, што вакцыны на базе circRNA, як наступнае пакаленне mRNA, могуць стануць эфектыўнымі інструментамі ў будучыні для барацьбы з частымі віруснымі/бактарыяльнымі хворобамі і галоўнымі новапачыннымі заразнымі хворобамі, а таксама для лікання рака і іншых хвороб.
CircRNA ў карыстацці CAR/TCR-T тэрапіі
Як пионер у галіне цыклічнага RNA, ORNA развяртае тэрапію з ужываннем хімэрных антагенаўых рэцэптараў (CAR) in situ для лікарстваў, якія выкарыстоўваюць ORN-101 — цыклічны RNA, ўпаўлічаны ў ЛНП, каб модуляваць імунныя клеткі ў пацыентах. ORN-101 прадстаўляе высоку выразгу CAR, кіруемую аптымізаваным элементам IRES. У модэлях жывёл было паказана, што ORN-101 спасабеніў прывесці да трамавання і нашчаджэння опухалей, што супрацоўвае, што лікарства ад раку на базе ORN-101 можа перачыніць традыцыйную тэрапію CAR-T клеткамі.
Кропка да гэтага, Чанг і інш. ацанілі жыццяспасабнасць і лікальную эфектыўнасць circRNA ў T-клетковай тэрапіі з T-клетковым рэцэптарам (TCR), спецыфічным для антыгена. Яны дызайнавалі circRNA, якая кодавала pp65-TCR-T, метаячы на эпітап pp65 цитамегавіруса (CMV). Кропка да гэтага, pp65-TCR паказвае, што яна выражаецца на первародных T-клетках больш за 7 дзён. Кропка да гэтага, circRNA-pp65-TCR-T клеткі спецыяльна і пастаяна забівалі клеткі pp65- і HLA-выражаных опухалей і значна падalaryла час жыцця мышей.
Паказана была і тая факта, што клеткі, трансфекаваныя pp65 circRNA, прадстаўляюць лепшую імунную адказнасць у порання з лінейным mRNA.
Yaohai’s Bio-Pharma Адзін Працэс CRDMO Для Далучэння RNA
|
Каталог RNA-вырабоў
- Каталог продукцый mRNA
- Каталог продукцый saRNA
- Каталог продукцый circRNA
|
Замовіць синтэз RNA
- Замовіць синтэз mRNA
- Даручальная сінтэзіса saRNA
- Даручальная сінтэзіса circRNA
|
Паслугі CDMO mRNA
- Развіццё працэсу
- Вытворэнне па GMP
- Асептычнае запаўненне і завяршэнне
- Аналіз і тэсты
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
