Значэнне развіцця працэсу ўнізе (DSP).
Увесь ферментацыйны булён змяшчае мэтавы бялок або плазміду, а таксама прымешкі, звязаныя з прадуктам і працэсам, напрыклад, агрэгаты, субстраты мікробных клетак, вавёркі клеткі-гаспадара (HCP), ДНК клеткі-гаспадара (HCD), эндатаксіны і антыбіётыкі.
Такім чынам, вельмі важна распрацаваць эфектыўны DSP, працэс ачысткі, каб выдаліць пэўныя прымешкі і вырабіць высокаачышчанае і якаснае лекавае рэчыва. Акрамя таго, аптымізацыя працэсу ачысткі можа дапамагчы павялічыць аднаўленне прадукту, знізіць выдаткі і палепшыць маштабаванасць і ўзнаўляльнасць працэсу.
Ключавыя словы: распрацоўка працэсу, аптымізацыя і валідацыя, працэс ачысткі, храматаграфія, ліквідацыя прымешак, выдаленне HCP, ліквідацыя HCD, выдаленне эндатаксіну, дэнатурацыя і рэфолдынг бялку, зборка VLP, кан'югацыя
Прымяненне: Біяфармацэўтычная прамысловасць, медыцына для чалавека, медыцына для жывёл, вакцына, рэкамбінантныя біяпрэпараты з вялікай малекулай, рэкамбінантныя біяпрэпараты, біялагічны рэагент
Рашэнні DSP кампаніі Yaohai Bio-Pharma
Мы маем вялікі вопыт вылучэння мэтавых бялкоў або плазмід са складаных матрыц шляхам распрацоўкі і аптымізацыі наступнага працэсу ачысткі. Існуюць розныя тыпы агрэгатаў, якія падыходзяць для ачысткі біяпрэпаратаў, у тым ліку цэнтрыфугаванне, фільтраванне, гамагенізацыя, шчолачны лізіс, ультрафільтрацыя, асаджэнне, дэнатурацыя бялку і рэфолдынг, храматаграфія і г.д.
Нашы даступныя паслугі па распрацоўцы ачысткі ўключаюць:
- Распрацоўка ўсяго працэсу ачысткі ад збору клетак або супернатантаў да канчатковага актыўнага інгрэдыента.
- Аптымізацыя працэсу ачысткі на аснове прадукту і звязаных з працэсам прымешак для павышэння якасці і бяспекі прадукту, напрыклад, HCP, HCD, эндатаксіны.
- Вызначэнне і аптымізацыя ключавых параметраў у адной або некалькіх аперацыях прылады, уключаючы лізіс клетак, тангенцыяльную фільтрацыю патоку, скрынінг смалы, храматаграфію, дэнатурацыю і рэфолдынг бялку і г.д.
- Аптымізацыя працэсу з пункту гледжання якасці, выхаду, аднаўлення, кошту і маштабаванасці.
- Праверка наступнага працэсу ачысткі.
- Ацэнка дыяпазону параметраў на аснове рызыкі і планаванне эксперыментаў (DoE) у мадэляванні працэсаў.
Падрабязнасці аб паслузе
Стандартызаваныя платформы ачысткі бялку або плазміды заснаваны на некалькіх грубых этапах ачысткі і менш чым 4 этапах храматаграфіі, уключаючы захоп, прамежкавую ачыстку і паліроўку.
| Падрабязнасці аб паслузе |
Аперацыі падраздзялення |
параметры |
| Грубая ачыстка |
Цэнтрафугаванне |
Хуткасць кручэння, час |
| Гамагенізацыя пад высокім ціскам |
Агульнае ўтрыманне цвёрдых рэчываў, ціск, цыклы |
| Бесперапынны шчолачны лізіс |
Стаўленне рэсуспендаваных клетак да раствора для лізісу, час лізісу |
| Фільтрацыя па датычнай плыні |
Матэрыял мембраны і памер пор, хуткасць патоку корму, трансмембранны ціск (TMP), суадносіны аб'ёму фільтрата і плошчы мембраны |
| Ападкі |
Тып і канцэнтрацыя асадніка, дабаўка, pH, тэмпература, час |
| Дэнатурацыя і рефолдинг |
Солюбилизация бялку цела ўключэння |
Канцэнтрацыя дэнатуратара (напрыклад, мачавіна, гуанідзін HCl, моцны іённы дэтэргент), мыйныя сродкі (напрыклад, дадэцылсульфат натрыю, SDS), аднаўляльнікі (напрыклад, дитиотреитол, DTT), хелатирующие агенты (этылендыямінтэтрауксусная кіслата, ЭДТА), тэмпература, час |
| Рефолдинг бялку |
Метады паўторнага згортвання (развядзенне, дыяліз або паўторнае згортванне SEC), канцэнтрацыі бялку, буферы, pH, тэмпература, час, акісляльнікі і аднаўляльнікі (напрыклад, глутатыён, GSH/акіслены глутатыён, GSSH, DTT/GSSH, цыстэін/цыстын), малыя малекулы дабавак (L-аргінін, мачавіна, гуанідзін/HCl і мыйныя сродкі) |
| Захоп, прамежкавая ачыстка і паліроўка |
AC (афінная храматаграфія) |
Некалькі тыпаў храматаграфічнай смалы/калонкі (напрыклад, AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), даўжыня і дыяметр калонкі, склад буфера, аб'ём ін'екцыі, склад рухомай фазы (адсорбцыя і дэсорбцыя), pH, хуткасць патоку, звязванне, Умовы прамывання і элюіравання. |
| IEX (аніённая або катыённая храматаграфія) |
| HIC (храматаграфія гідрафобнага ўзаемадзеяння) |
| Абяссольванне і/або эксклюзійная храматаграфія (SEC) |
| RPC (зваротна-фазавая храматаграфія) |
| MMC, храматаграфія ў змешаным рэжыме |
Кейс
Справа 1
Нам даручана распрацаваць і аптымізаваць наступны працэс ачысткі, каб павялічыць чысціню бялку з 85% да 90% пры адначасовым скарачэнні этапаў храматаграфіі.
Кампанія Yaohai паставіла надзейны і маштабаваны працэс ачысткі з 3 этапамі храматаграфіі мэтавага бялку, бактэрыяльнай алергіі. А канчатковая чысціня дасягнула 95%.
Справа 2
Yaohai быў прызначаны нашым кліентам для аптымізацыі працэсу выдалення эндатаксінаў вакцыны супраць вірусападобных часціц (VLP).
Наша каманда правяла аптымізацыю параметраў храматаграфіі і падрыхтавала лекавую субстанцыю з чысцінёй 98% і астаткам эндатаксіну 12.8ЕУ/мг.
Наш вопыт
- Мы ўдзельнічалі ў распрацоўцы і вытворчасці розных вялікіх малекул, у тым ліку рэкамбінантных субадзінак вакцын, VLP, гармонаў (інсулін, GLP-1, гармон росту), цітокіны (інтэрлейкін-2/IL-2, IL-15, IL-21). ), фактары росту (EGF, FGF, NGF), нанацелы/аднадаменныя антыцелы (sdAbs), ферменты і г.д.
Абсталяванне
Мы выкарыстоўваем вядучыя ў галіны сістэмы ВЭЖХ AKTA Pure, AKTA Avant і Preparative для правядзення розных метадаў храматаграфіі, уключаючы афінную храматаграфію, іонаабменную, гідрафобнае ўзаемадзеянне, зваротную фазу і эксклюзійную храматаграфію.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
