Даныя пептыднага карціравання на аснове вадкаснай храматаграфіі і мас-спектраметрыі (LC-MS) дадуць вялікую колькасць інфармацыі аб першаснай структуры і структуры больш высокага парадку натыўных і рэкамбінантных бялкоў, уключаючы ахоп паслядоўнасці амінакіслот, посттрансляцыйныя мадыфікацыі (PTM, напрыклад, гліказіляванне , акісленне, дэзамідаванне), дысульфідныя сувязі і інш.
Yaohai Bio-Pharma прапануе паслугі па аналізе карціравання пептыдаў для вашага мэтавага бялку з дапамогай LC-MS, каб паскорыць даследаванне структуры бялку.
Мы ўдзельнічалі ў структурнай характарыстыкі бялку розных вялікіх малекул, у тым ліку рэкамбінантных субадзінак вакцын, нанацелаў/VHH/аднадоменных антыцелаў (sdAbs), фрагментаў антыцелаў, гармонаў/пептыдаў, цітакінаў, фактараў росту (GF), ферментаў, калагенаў, г.д.
Нарматыўныя патрабаванні да карціравання пептыдаў
Кіраўніцтва ICHQ6B рэкамендуе: «Селектыўная фрагментацыя прадукту на асобныя пептыды выконваецца з выкарыстаннем адпаведных ферментаў або хімічных рэчываў, а атрыманыя фрагменты пептыдаў аналізуюцца з дапамогай ВЭЖХ або іншай адпаведнай аналітычнай працэдуры. Пептыдныя фрагменты павінны быць ідэнтыфікаваныя, наколькі гэта магчыма, з дапамогай такіх метадаў, як аналіз складу амінакіслот, N-канцавое секвенирование або мас-спектраметрыя (МС). Пептыднае карціраванне дзеючага рэчыва або лекавага сродку (DP) з выкарыстаннем належным чынам праверанага метаду - гэта метад, які часта выкарыстоўваецца для пацверджання патрэбнай структуры прадукту для серыйнага выпуску».
Аналітычныя метады
| Аналіз |
Методыка |
| Карціраванне пептыдаў |
Расшчапленне пратэазамі і вадкасная храматаграфія-мас-спектраметрыя (LC-MS) |
Аналітычная працэдура
1. Аднаўленне і алкілаванне
Мэта складаецца ў тым, каб паменшыць дысульфідныя масткі і блакаваць генераваны свабодны тиол. Аднаўленне дисульфидных масткоў спрыяе раскрыццю бялковай структуры, што робіць пратэялітычных страваванне больш эфектыўным. Гэты этап таксама разбурыць масты паміж ланцугамі ў выпадку шматланцуговых бялкоў, якія маюць дысульфідныя масткі, якія злучаюць ланцугі (напрыклад, моноклональные антыцелы, mAbs).
2. Пераварванне бялку з дапамогай ферментаў
Мэта складаецца ў тым, каб расшчапіць бялок да пептыдаў. Мы абралі базу ферментаў на аснове тэарэтычнай паслядоўнасці бялку і ведаў аб тэарэтычным пераварванні бялку ферментамі. Выбар ферментаў такім чынам павінен прывесці да найлепшага аналізу карціравання пептыдаў.
3. Аналіз перавараных пептыдаў Выкарыстанне вадкаснай высокаэфектыўнай храматаграфіі са зваротнай фазай у рэжыме он-лайн з ультрафіялетавым (УФ) і электрараспыляльным мас-спектраметрычным выяўленнем (LC/ES-MS).
Падзел пептыдаў на аснове палярнасці з выкарыстаннем LC (зваротная фаза-LC)
Калі пептыд элюіруецца з калонкі LC, мас-спектрометр будзе генераваць інфармацыю аб масе разам з інфармацыяй аб фрагментах іёнаў, што дазваляе нам вызначыць інфармацыю аб паслядоўнасці. Мы выкарыстоўваем інфармацыю аб паслядоўнасці, каб пацвердзіць ідэнтычнасць пептыда і даць першасную інфармацыю.
Мы таксама можам генераваць інфармацыю аб фрагментацыі з пептыдаў, калі яны трапляюць у крыніцу мас-спектрометра з калонкі LC. У залежнасці ад патрабаванняў даследавання гэта альбо селектыўная ВХ-МС/МС, альбо неселектыўная, якую можна разглядаць як форму тандэмнай МС.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
