Даныя карта пептыдаў, атрымліваеся з дапамогай жыдкавай хроматаграфіі-мас-спектраметры (LC-MS), забяспечваюць шырокі спектр інфармацыі аб першачыннай і вышэйшай структуры натывных і рекамбінатных белкаў, уключая кryпцiвую крыху амінаўых кислот, посттрансляцыйныя модыфікацыі (ПТМ, напрыклад, глюкозаванне, аксідацыя, дэамідацыя), двусульфідныя сувязі і т.д.
Yaohai Bio-Pharma працягвае аналіз карта пептыдаў для вашага цэлевага белка ў LC-MS, каб прыспае вашым даследаванням структуры белка.
Мы ўдзельнічалі ў характарыстыцы структуры белкаў розных вялікіх молекулаў, уключаючы Рекамбінатныя Пададзелы Вакцын, Нанатэлі/ВНН/ Единственныя Дамены Антагенаў (sdAbs), Антагенныя Фрагменты, Гормоны/Пептыды, Цытайкіны, Факторы Росту (GF), Энзымы, Коллагены і іншыя.
Рэгламентаваныя патрабаванні да карта пептыдаў
Падручнік ICHQ6B прапануе: «Выбарная фрагментацыя прадукту ў дыскрэтныя пептыды выконваецца з дапамогай падходзячых энзымоў ці хімічных рэакцый, а выніковыя пептыдныя фрагменты аналіруюцца з дапамогай ВЖХ ці іншага падходзячага аналітычнага метада. Пептыдныя фрагменты насколькі можна ідэнтыфікуюцца з дапамогай тэхнік, такіх як аналіз складу амінаўых кислот, секвенцыраванне N-канца ці мас-спектраметрыя (MS). Пептыднае картааванне акtyвнай супстанцыі ці лекарственнага прадукту (DP) з выкарыстаннем падходзячага ўдакладненага метада — гэта метад, які часта выкарыстоўваецца для пацверджэння бажанай структуры прадукту пры выпуску партыяў.»
Аналітычныя метады
| Аналіз |
Метады |
| Пептыднае карта |
Дыжэстацыя пратэаз і жыдкая хроматографія-мас-спектраметрыя (LC-MS) |
Аналітычная працедура
1. Рэдукцыя і алкіляцыя
Метадынасць заключаецца ў зменшэнні дысульфідных сувязаў і блакаванні выніковага свабоднага тіолу. Зменшэнне дысульфідных сувязоў дапамагае адкрыць структуру белка, што робіць протэалітычную дыжэстыю буйнейшай. Гэтая фаза таксама перарэзае сувязі паміж ланцугамі ў выпадку многачленаўных белкаў, якія маюць дысульфідныя сувязі, злучваючы ланцугі (напрыклад, манаклональныя антыйдны, mAbs).
2. Дыжэстыя белка з дапамогай энзымоў
Метадынасць заключаецца ў разбіцці белка на пептыды. Мы выбрали энзымы на аснове тэорэтычнай сяквенцыі белка і ведаў пра тэорэтычную дыжэстыю белка энзымамі. Выбар энзымоў у такім спосабе павінен прывесці да найлепшага аналізу карта пептыдаў.
3. Аналіз дыжэстых пептыдаў З дапамогай Он-лайн Рэвэрсаванай Фазы - Високаспрадкаснага Цікавага Хроматаграфавання з Ультрафіалетавай (UV) і Дэтекцыя Мас Электрасpray (LC/ES-MS).
Разлучэнне пептыдаў па ях полярнасці з дапамогай LC (ревэрсаваная фаза-LC)
Пакіคา що пептыд выцягваецца з колонкі LC, мас-спектраметр згенеруе масавую інфармацыю разам з інфармацыяй аб фрагментацыі іонаў, што дазваляе нам вызначыць секвенцыйную інфармацыю. Мы карыстаемся гэтай секвенцыйнай інфармацыяй, каб пацвердзіць тautбітнасць пептыдаў і прысутнічаць у якаснай інфармацыі.
Мы таксама можам атрымаць інфармацыю аб фрагментацыі ад пептыдаў, калі яны ўходзяць у крыніцу мас-спектраметра з колонкі LC. Залежна ад патрабванняў даследвання, гэта або селектыўны LC-MS/MS, ці несэлекцыйны, што можна лічыць родаём тандэмнага MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
