мРНК шырока выкарыстоўваецца ў вывучэнні функцый генаў або бялкоў. Між тым, ён распаўсюджаны ў распрацоўцы прафілактычных і лячэбных біяпрэпаратаў. Як звычайная стратэгія сінтэзу малекул РНК, транскрыпцыя in vitro (IVT) дазваляе нам эфектыўна атрымліваць індывідуальныя транскрыпцыі.
Yaohai Bio-Pharma стварыла набор тэхналогій сінтэзу мРНК для забеспячэння высакаякаснай РНК, такіх як распрацоўка і аптымізацыя паслядоўнасці, IVT, ачыстка, ліяфілізацыя і інкапсуляцыя ліпідных наначасціц (LNP). Усе прадукты выпускаюцца ў адпаведнасці са строгімі стандартамі кантролю якасці (QC).
З выбухам пандэміі COVID-19 у 2020 годзе тэхналогія мРНК пайшла наперад не па гадзінах, а звязаныя з ёй даследаванні і прымяненне атрымалі беспрэцэдэнтнае развіццё, у тым ліку прафілактычныя вакцыны для прафілактыкі інфекцыйных захворванняў, тэрапеўтычныя анкалагічныя вакцыны і лекі, тэрапія пухлін, бялок замяшчальная тэрапія, рэгенератыўная медыцына і клеткавая і генная тэрапія (КГТ).
мРНК вакцына | Тэрапеўтычныя сродкі мРНК |
|
Працэс | Дадатковая паслуга | Падрабязнасці аб паслузе | Тэрмін дастаўкі (працоўны дзень) | Дастаўка |
Дызайн і аптымізацыя паслядоўнасці мРНК | Дызайн і аптымізацыя паслядоўнасцей кадавання | Дызайн паслядоўнасці CDS і аптымізацыя кодона | 1-3 | Файл паслядоўнасці |
Дызайн і аптымізацыя некадуючых паслядоўнасцей | Дызайн і аптымізацыя паслядоўнасцей UTR, polyA | |||
Падрыхтоўка плазміды шаблону транскрыпцыі | Прэпарат рэкамбінантнай плазміды | Сінтэз генаў | 7-10 | |
Ампліфікацыя і экстракцыя плазмід | 4 | |||
Лінеарызацыя і ачыстка плазмид | ||||
Транскрыпцыя мРНК in vitro | Катранскрыпцыйнае абмежаванне (аднаэтапны метад) | Транскрыпцыя in vitro (IVT) / аналаг Cap | 1-2 | N / A |
Нуклеатыдныя мадыфікацыі (UTP/CTP мадыфікацыі) | ||||
Выдаленне шаблону ДНК (DNase I) | ||||
Ферментатыўнае капіраванне (двухэтапны працэс) | ЭКА | 2-3 | ||
Нуклеатыдныя мадыфікацыі (UTP/CTP мадыфікацыі) | ||||
Выдаленне шаблону ДНК (DNase I) | ||||
Ачыстка мРНК (хларыд літыя/магнітныя шарыкі) | ||||
Ферментатыўнае капирование | ||||
Ачыстка мРНК | Звычайная схема ачысткі | Асаджэнне хларыду літыя | 1 | мРНК лекавага рэчывы |
Ачыстка магнітнымі шарыкамі | ||||
Схема ачысткі храматаграфічнай калонкі | Спалучэнне некалькіх метадаў храматаграфіі | 1-2 | ||
Буферны абмен | Ультрафільтрацыя | 1 | ||
Лиофилизация мРНК | Ліофілізацыя | Папярэдняя замарозка | 2-3 | мРНК лиофилизированный парашок |
Першасная сушка (сублімацыя) | ||||
Другасная сушка (дэсорбцыя) | ||||
Інкапсуляцыя мРНК | Інкапсуляцыя LNP | Інкапсуляцыя LNP | 2-3 | мРНК-LNPDrug прадукт |
Канцэнтрацыя і буферны абмен | ||||
Аналіз якасці мРНК | мРНК лекавая субстанцыя / лиофилизированный парашок | Канцэнтрацыя, чысціня | 1 | пратакол выпрабаванняў |
Цэласнасць, эфектыўнасць укупорки, размеркаванне хваста polyA | 2-5 | |||
мРНК-LNP лекавы прадукт | Эфектыўнасць інкапсуляцыі | 1 | ||
Памер і размеркаванне часціц | ||||
Павярхоўны зарад | ||||
Праверка экспрэсіі мРНК | Ацэнка клетак 293T | Пакрыццё клетак | 4 | |
Транзістарных трансфекцыя клетак | ||||
Назіранне сігналу флуарэсцэнцыі | 1-3 | |||
Вэстэрн-блот (WB) / Імунаферментны аналіз (ELISA) |
5' Кап | ▪ Незакаркаваная ▪ Cap0, са-кап ▪ Cap1, са-кап ▪ Cap1, ферментатыўнае капаванне |
5' UTR/3' UTR | ▪ Паслядоўнасць UTR прыроды ▪ Паслядоўнасць UTR мутанта/спраектаванай |
3' PolyA хвост | ▪ 100A ~120A хвост (рэкамендуецца) ▪ Сегментаваны поліА хвост ▪ Іншыя нестандартныя хвасты |
Мадыфікаваныя нуклеазіды | ▪ Немадыфікаваныя базы ▪ Псеўдаурыдын (Ψ) ▪ N1-Метылпсеўдаурыдын (N1Ψ) ▪ 5-метилцитозин (m5C) ▪ 5-метилуридин (m5U) ▪ 5-метоксиуридин (5moU) ▪ 2-тыурыдын (s2U) ▪ 2'-O-пазначаў-U ▪ Іншыя мадыфікацыі |
Паток інтэграваных паслуг
Прадастаўленне шэрагу паслуг ад распрацоўкі пачатковай паслядоўнасці да падрыхтоўкі сістэмнай мРНК, кантролю якасці і праверкі экспрэсіі.
Міжнародны перадавы дызайн паслядоўнасці і аптымізацыя
Прафесійны дызайн паслядоўнасці мРНК і аптымізацыя спрыяюць эфектыўнай экспрэсіі мРНК.
Разнастайныя мадыфікацыі нуклеатыдаў
Эфектыўна павялічвае экспрэсію мРНК і памяншае неспрыяльныя імунныя рэакцыі мРНК.
Спелая платформа ачысткі
Камбінуючы звычайны і самастойна распрацаваны метад ачысткі, узоры мРНК атрымліваюцца высокай чысціні
Поўная платформа кантролю якасці
Павялічце параметры кантролю якасці, каб адпавядаць патрабаванням звычайных выпрабаванняў, такіх як канцэнтрацыя, чысціня A260/280 і цэласнасць, а таксама высокім патрабаванням кантролю якасці, такім як эфектыўнасць укупоркі/размеркаванне поліА.
хуткая дастаўка
Індывідуальныя мРНК могуць быць дастаўлены ўсяго за 7 дзён, за выключэннем сінтэзу паслядоўнасці аўтсорсінгу.