Падготовка CircRNA патрабуе лінейнага RNA як прэкурсара (RNA прэкурсара) для цыклізацыі, дзе RNA прэкурсар звычайна падготавляецца з выкарыстаннем лінейнага плазміднага DNA як транскрыпцыйнага шаблона і транскрыбуюцца in vitro з дапамогай T7 RNA-полімеразы.
Выsoкае якасць плазмiднага DNA засноўнае для транскрыпцыі in vitro (IVT). На базе даследвання сапраўднай платформы падготовкі плазмiд, Yaohai Bio-Pharma можа атрымаць высоцей чыстасць i стандартную лінейную плазмiдную DNA (pDNA) пад выконанне IVT-прадуктаў.
ПРОЦЕС | Апцыянальная служба | Дэталі сервісу | Тэрмін выканання (робальны дзень) |
Падготовка цыркуляванага плазміда | Сінтэз гена | Сінтэз гена (Трэція сторона) | 7-10 |
Ампліфікацыя плазміда | Ампліфікацыя плазміда | 2 | |
Выдзеленне плазміда | |||
Падготовка лінейнага плазміда | Лінейрызацыя і чысценне плазмід | Лінеарызацыя плазміда | 1 |
Чыстка ДНК пасля лінеарызацыі | |||
Кантроль якасці ДНК плазміда | Канцэнтрацыя чыстата | Ультрафіолетавая (UV) спектрафотаметрыя | 1-2 |
Канфігурацыя плазміда | Электрафарэза ў агарасавай гелю (AGE) | ||
Капілярны электрафарэз (CE)-додатковы | |||
Адыдэнтыфікацыя плазміда | Ідэнтыфікацыя рэстрацыйным энзымам/ЭАГ |
Гнучкае выбар лінейных метадаў
Аптымізацыя метадаў выцягнення і чысткі ДНК для дасягнення высокіх ступеней аднаўлення.
Строгія стандарты кантролю працэса, з удзелам суперспіральнай канфігурацыі плазмідных пробы для даследвання больш за 80%.
Прынцыпы высокага ўзроўню і эфектыўнасці падготовкі плазмід і службовага контролю якасці для задаволення експерыментальных патрабаванняў.
Узяўшы прыклад продукту Yaohai Bio-Pharma mCherry circRNA, частка суперспіралізацыі транскрыпцыйнага шаблона плазмідных прыкладак (даследчая градацыя) больш за 70%, з лінейнымі ратарамі, блязкімі да 100%.
mCherry circRNA падготавляецца з лінейванай плазмідай як шаблонам і трансфекцыйваецца ў клеткі 293T. Пасля 24 гадзін трансфекцыі выявляецца високі ўзроўень экспрезіі флуорэсцэнцыі (чырвоная флуорэсцэнцыя), якая пацвердзіцца праз 48 гадзін і можа быць выяўленая на 7-ы дзень і 14-ы дзень пасля трансфекцыі.
белак mCherry стабільна і эфектыўна экспрезуецца, а чыстка транскрыпцыйнага шаблона можа задавальняць патрабаванні высокаякаснага продукту леkarственнай circRNA.
Даўная вярэннасць выразу mCherry circRNA in vitro