капінга 5'-канца - гэта неабходная модыфікацыя mRNA. mRNA з кап-структурамі, асабліва з Cap1-структурамі, дапамагаюць mRNA ўникнуць ад імунных адказаў у живых організамах, што прыводзіць да эфектыўнага перакладу белка.
Энзыматычная капінга (двухэтапны метад) - гэта класічны спосаб капінгі mRNA, які сходзіцца з процесам капінгі ў еукарыятных арганізамах. Пад дзеяннем серыі энзымоў, 7-метылгуанін (m7G) з'яўляецца звязанай з 5'-канцам mRNA праз 5'-5' трифосфатную сувязь і падвергаецца метылацыі, формуючы кап-структуру Cap 1 (m7GpppN).
Схема фарміравання натуральнай кап-структуры
Працэс энзыматычнай капінгі выглядае так:
Лінейны ДНК плазміда выкарыстоўваецца як шаблон для транскрыпцыі вяршэння ў прысутнасці палімеразы T7, і mRNA з капой на 5'-канцы фармуецца пасля аднаго кroку чыстення з выкарыстаннем ензыму капіравання вакцыні і 2'-O-метылтрансферазы.
Дэталі служб
Апцыянальная служба |
Дэталі сервісу |
Перыяд дастаўкі (Дзень) |
энзыматычнае закрыццё mRNA |
Энзымная реакцыя капіравання |
1 |
Аптымізацыя реакцыі капіравання - неабходна |
Дызайн і аптымізацыя кампанентаў реакцыі |
3~7 |
Нашы харастыкі
- Дэзайн і аптымізацыя кампанентаў реакцыі капіравання
Кампанента реакцыі капінга аптымізавана, і вытвораўся значна павелічаная працэдура транскрыпту mRNA.
- Падтэрджванне экспрэсіі віталя
Капінгавы mRNA трансфектуецца ў клеткі 293T, і можна выяўляць экспрэсію цэлевага белка.
Пры стрыгатальнай кантролі RNases у даследчым сяроддзі і кансумабельных, дэградацыя mRNAэффектыўна спыняецца.
Прыклад даследвання
Платформа mRNA Yaohai Bio-Pharma стварыла ідэальны працэс капінга.
Для mRNA eGFP, прэдвызначанага ферментным капінгам, пасля трансфектавання клетак 293T на працягу 24 гадзін можна ўбачыць высокую ўзровень зелёнае флуорэсцэнтнае святла (зелёная флуорэсцэнцыя), якая выявляецца метадам Western Blot (WB), што падтварае, што цэлевы белок — паліпчаная зелёная флуорэсцэнтная белка (eGFP) — можа быць эфектыўна экспрэсавана віталя.
Экспрэсія ферментнага капінга eGFP mRNA ў клетцы 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
